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本试验以家畜活体保种规划为基础，鲁西黄牛为试验材料，利用组织块培养法，首次建立了鲁西黄牛耳皮肤上皮细胞和成纤维细胞系，从屠宰场收集卵巢，回收卵丘卵母细胞复合体，培养成熟后的卵母细胞作为核受体，以第六代成纤维细胞作核供体进行核移植，研究了体细胞克隆技术在家畜遗传资源保护中的应用。结果表明：1.通过组织块培养法，获得了传代培养的鲁西黄牛耳皮肤成纤维细胞和上皮细胞。鲁西黄牛皮肤细胞在体外培养时呈贴壁生长,原代与早期传代细胞是上皮细胞与成纤维细胞的混合物；2.传代培养混合生长的细胞用0.25%胰蛋白酶液37 ℃下消化处理2~3min，脱壁悬浮的主要为成纤维细胞，采用反复消化法在传代过程中将二者逐步分离纯化，获得了可正常传代的鲁西黄牛耳上皮细胞系和成纤维细胞系，表明采用反复消化法可以分离纯化上皮细胞和成纤维细胞；3.通过绘制生长曲线研究了鲁西黄牛耳皮肤成纤维细胞的增殖规律，用高糖DMEM培养第四代鲁西黄牛皮肤成纤维细胞，传代后滞留期较短，约有一天左右，活细胞逐渐贴壁生长。此后进入对数生长期，延续六天左右。第八天细胞发生接触抑制而开始死亡，细胞数量进入平台期，维持三天左右，细胞逐渐脱落死亡，细胞数有所下降。4.染色体检查表明，鲁西黄牛耳皮肤成纤维细胞在适宜的培养体系，至少可以传代至12代并保持染色体倍性正常；5.细胞冷冻试验中，以甘油与DMSO为冷冻保护剂，添加10%血清的DMEM为基础液，同浓度DMSO作为冷冻液的防冻成分效果优于同浓度甘油（p<0.05）；DMSO与甘油浓度一定时，血清浓度越高冷冻效果越好（p<0.05）； 6.从冷冻鲁西黄牛耳皮肤组织中成功培养出细胞，证明从冷冻保存的组织中进行细胞的分离培养是可行的。冷冻组织培养出的细胞核型正常，与新鲜组织培养的细胞相同，可以用作细胞生物学及其它相关试验研究的材料；7.进行体细胞克隆时，采用血清饥饿法与生长抑制法处理供体细胞，结果分裂率有差异（p<0.05），但囊胚率无差异(p>0.05)，说明两者均可用于供体细胞的处理；8.用胚胎细胞差异染色法，对第7天的克隆重构胚进行细胞记数，结果表明内细胞团细胞与滋养层细胞平均数为37和47，内细胞团细胞占细胞总数的44.2%；9.采用体细胞克隆技术克隆鲁西黄牛，获得囊胚66枚，其中移植受体10头，移植妊娠率（60天）为20%（2/10）。