论文部分内容阅读
背景与目的:肺癌是全球人口中发病率最高的肿瘤性疾病,也是导致癌症相关死亡的最主要原因之一。肺癌的转移是导致患者预后不佳的重要因素,而上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是肺癌转移过程中的关键事件。既往有许多研究报道了长链非编码RNA(long noncoding RNA,lnc RNA)在包括非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)在内的多种肿瘤中发挥重要的调控作用。本研究旨在探索lnc RNA linc00673在NSCLC中对细胞增殖、迁移、侵袭能力以及EMT过程的调控功能及其在NSCLC中的预后价值,并进一步探索其发挥调控功能的分子机制。方法:采用CCK-8实验和EdU实验检测细胞的增殖能力;采用划痕实验和Transwell侵袭实验分别检测细胞的迁移能力和侵袭能力;实时荧光定量PCR被用于检测各种RNA分子的表达水平和EMT标志物的转录水平;蛋白免疫印迹实验和免疫荧光实验被用于检测EMT标志物的蛋白表达情况。采用双荧光素酶报告基因实验检测微小RNA(micro RNA,miRNA)与靶基因的互作情况。小鼠肺癌移植瘤实验被用于检验linc00673在动物体内对肿瘤形成的调控能力。采用生物信息学和循证医学的方法分析linc00673/miR-150-5p/ZEB1轴在NSCLC中的预后价值。结果:Linc00673可以促进NSCLC细胞的增殖、迁移、侵袭能力以及EMT过程,敲降linc00673表达水平显著逆转了由TGF-β诱导产生的EMT,而且也显著抑制了NSCLC移植瘤在小鼠体内的生长。Linc00673可以靶向结合miR-150-5p,过表达miR-150-5p后显著抑制了linc00673的表达水平,而抑制miR-150-5p则可以显著上调linc00673的表达水平,在双荧光素酶报告基因实验中我们也得到了相同的结论。同时,miR-150-5p可以靶向结合EMT关键转录因子ZEB1 m RNA的3’端非翻译区并抑制其表达,因此linc00673可以通过以内源竞争性RNA(competing endogenous RNA,ce RNA)的形式抑制miR-150-5p在细胞内的表达水平从而间接解除其对ZEB1的抑制作用,促进NSCLC中EMT的发生。此外,linc00673高表达提示NSCLC患者预后不佳,而miR-150-5p高表达则与NSCLC患者预后良好相关。在对ZEB家族成员的预后价值分析中,我们共筛选得到5项队列研究并对其报道的结果进行了合并,发现ZEB1高表达也与NSCLC患者的不良预后显著相关。结论:Linc00673以ce RNA的形式靶向结合miR-150-5p,间接上调ZEB1的表达水平,促进NSCLC细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT发生。Linc00673和ZEB1高表达提示NSCLC患者预后不佳,miR-150-5p高表达则与患者预后良好相关。综上,linc00673/miR-150-5p/ZEB1轴在非小细胞肺癌中发挥了关键的调控功能并且具有重要的预后价值。