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子宫内膜炎是一种重要的产科疾病,是造成奶产业效益低下的重要原因。大肠杆菌是引起子宫内膜炎的主要致病菌之一,大肠杆菌LPS作为一种致病因子,在感染中起到关键性的作用。研究显示,内质网应激与UPR在子宫内膜炎的发生发展中起到重要的调节作用,Luman作为内质网膜结合的转录因子,具体调节机制仍不明确。本试验通过构建Luman慢病毒干扰的山羊子宫内膜上皮细胞系,探究在LPS刺激下Luman对UPR的调控机制及相关炎性因子的表达情况,进一步明确内质网应激与UPR在先天性免疫中的调节作用,为子宫内膜炎的治疗提供理论依据。试验结果如下:(1)构建山羊Luman慢病毒干扰载体,qPCR,Western Blot和免疫荧光检测干扰效率,干扰效率可达70%;CCK8试剂盒和BeyoClick?EdU-555试剂盒检测细胞的增殖情况,发现Luman干扰后能显著提高细胞的增殖水平;流式细胞术检测细胞周期,qPCR检测周期蛋白Cyclin A,Cyclin B,Cyclin D的表达量,发现Luman干扰后G1期显著降低,周期蛋白Cyclin D表达量显著增加。(2)应用免疫荧光对gEECs中的Luman进行定位表达,发现Luman主要定位于细胞质中,在细胞核中亦有少量表达。(3)LPS处理gEECs,ELISA方法检测IL-1β,IL-6,TNF-α的表达量,mRNA水平检测IL-1β,IL-6,TLR4,CD14,PTGS1,PTGS2和PTGES,发现LPS可以显著提高这些因子的表达量;检测内质网应激相关蛋白GRP78,phosphoIRE1和XBP1的表达,发现LPS可以显著提高这些蛋白的表达。(4)LPS处理gEECs shRNA-negative组与shLuman组,Western Blot检测UPR相关蛋白的表达,发现Luman干扰组细胞对LPS表现出更高的敏感性,干扰组的GRP78,phosphoIRE1,XBP1的表达量较对照组明显增多;ELISA检测IL-1β,IL-6,TNF-α的表达量,发现Luman干扰组中这些因子的表达量显著升高;mRNA水平检测IL-1β,IL-6,TLR4,CD14,PTGS1,PTGS2和PTGES的表达量,发现较对照组而言,Luman干扰组这些因子的表达量均显著升高;4-PBA处理LPS刺激的shLuman组,发现IRE1的表达量显著降低,相关炎性因子的表达量也显著降低。综上所述,通过构建山羊Luman慢病毒干扰载体,研究了Luman介导的UPR在山羊子宫内膜上皮细胞炎症反应中的作用,证明了Luman与UPR参与了LPS引起的细胞炎性反应,并且可能主要通过IRE1-XBP1通路影响相关炎性因子的分泌。该研究扩展了我们对Luman与UPR调控先天性免疫机制的理解,也为研究Luman与UPR的生物学功能提供新的线索。