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[目的]从中药材中提取分离得到辣蓼多糖,对其进行初步的化学表征分析,并评价其对小鼠巨噬细胞及免疫抑制小鼠的免疫调节活性,为辣蓼多糖的进一步开发及其在免疫调节中的应用提供一定的理论和技术基础。[方法](1)第一部分研究辣蓼多糖的化学组成,采用水提醇沉法提取辣蓼多糖(Polygonum flaccidum Meisum.polysaccharide,PFMP),苯酚-硫酸法测总糖的含量,硫酸-四硼酸钠法测定糖醛酸的含量,考马斯亮蓝染色法测定蛋白质的含量,HPLC分析辣寥多糖的单糖组成。(2)第二部分研究PFMP的体外免疫调节活性,以脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)为阳性对照,采用CCK-8试剂考察小鼠巨噬细胞Raw264.7细胞在不同浓度PFMP(6.25、12.5、25、50、100、200、400 μg/mL)作用24 h后,细胞增殖率的变化;采取中性红染色法考查Raw264.7细胞在低浓度(100 μg/mL)、中浓度(200 μg/mL)、高浓度(400 μg/mL)的PFMP作用24 h后,细胞对中性红染色试剂的吞噬活性;并进一步采取流式细胞术考查Raw264.7细胞在低、中、高浓度PFMP作用24 h后,对荧光标记葡聚糖40(FITC-dextran 40)的吞噬活性的变化;采用ELASA检测不同浓度PFMP作用后,Raw264.7细胞中细胞因子IL-6、TNF-α表达水平的变化。(3)第三部分研究PFMP的体内免疫调节活性,通过环磷酰胺(Cyclophosvnamide,CY)诱导建立免疫抑制小鼠模型,以盐酸左旋咪唑为阳性对照。模型组、左旋咪唑组和PFMP组在实验第3、5、7、9天腹腔注射CY 50 mg/kg,空白对照组注射等体积的0.9%氯化钠注射液。PFMP低、中、高剂量组每日分别灌胃给予辣蓼多糖100 mg/kg、200mg/kg、400mg/kg,左旋咪唑组灌胃给予盐酸左旋咪唑10mg/kg,空白对照组和模型组灌胃给予生理盐水,连续给药10天。实验终点观察各组小鼠的体质量、胸腺指数、肠道派氏结(Peyer’s Patches,PPs)个数、派氏结细胞中CD3+和CD19+细胞表型及其比例,并采用ELASA法检测小鼠血清中IL-10的浓度和肠道内sIgA的含量,进而评价PFMP对免疫抑制小鼠的免疫调节活性。[结果](1)本研究从中药材辣蓼中提取得到辣蓼多糖PFMP,其总糖、糖醛酸、蛋白质的含量分别为47.29%、22.94%、2.20%,HPLC结果表明,该多糖由D-甘露糖(D-mannose,Man)、L-鼠李糖(L-rhamnose,Rha)、D-葡萄糖醛酸(D-glucuronic acid,GlcA)、D-半乳糖(D-galactose,Gal)、D-葡萄糖(D-glucose,Glc)、L-阿拉伯糖(L-arabinose,Ara)6种单糖组成,是一种酸性杂化多糖。(2)PFMP的体外免疫活性实验结果表明,6.25-400 μg/mL的PFMP均能够促进Raw264.7细胞增殖,不同浓度的PFMP促增殖作用具有一定的差异。中性红实验表明,100-400μg/mL的PFMP均具有促进巨噬细胞吞噬的作用,其中200μg/mL的PFMP促吞噬效果较强。PFMP低、中、高剂量均能够在一定程度上增强Raw264.7细胞吞噬FITC-dextran 40的能力,其作用甚至强于LPS组(P<0.01);PFMP还显著影响Raw264.7细胞的形态,使其体积变大,部分形状改变,出现伪足,细胞内出现颗粒和空泡,进一步表明PFMP对Raw264.7细胞有明显的活化作用。此外,PFMP还能促进Raw264.7细胞分泌TNF-a、IL-6,具有一定的剂量依赖性。(3)PFMP的体内免疫活性表明,本研究经过4次注射50 mg/kg CY后,与空白对照组相比,模型组小鼠的胸腺指数显著降低,提示造模成功。另外,模型组小鼠的体质量增加值、肠道派氏结个数、IL-10浓度和肠道中sIgA的含量均显著低于空白对照组。PFMP低、中、高剂量组都能在不同程度上恢复免疫抑制小鼠的体重增加值、胸腺指数、派氏结个数和肠道中sIgA的含量,其中PFMP高剂量组效果最好,但PFMP低、中、高剂量组小鼠肠道中的sIgA含量与空白对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。此外,PFMP低、中、高剂量组均能在一定程度上恢复CY所致的CD3+/CD19+淋巴细胞比例失衡,其中,PFMP高剂量组恢复效果较好。PFMP高剂量小鼠血清中IL-10的浓度高于模型组,但结果没有差异(P>0.05),PFMP高剂量促小鼠血清分泌IL-10的水平较好。[结论]本研究采用水提醇沉法得到辣蓼多糖PFMP,分别从体内体外水平评价其免疫调节作用,证实PFMP能够促进巨噬细胞增殖及吞噬能力,并初步证实其能够抵抗CY所致的免疫抑制。为辣蓼多糖的开发及其免疫调节活性的研究提供了一定的理论支持和技术基础。