论文部分内容阅读
【研究背景】胶质瘤是成人最常见的原发性中枢神经系统肿瘤,根据美国脑肿瘤注册中心(CentralBrainTumorRegistryoftheUnitedStates,CBTRUS)统计,胶质瘤约占所有中枢神经系统肿瘤的28%,约占恶性肿瘤的80%[1]。目前胶质瘤的治疗方式主要为手术、放疗、化疗,虽然近年来在治疗方面已取得显着进步,但平均预后仍不足15个月[2]。放化疗等辅助治疗手段对中枢神经系统还可能产生毒副作用。因此,迫切需要为胶质瘤患者开发有效的治疗策略。近年来在胶质瘤形成和发展过程中的相关基因、分子机制及信号通路已得到广泛研究,但仍未明确发病机制。进一步探索胶质瘤发生、发展的相关基因,对提高胶质瘤的诊断及治疗水平具有重要的意义。长链非编码RNA(longnon-codingRNA,lncRNA)是一类长度大于200个核苷酸的非编码RNA。近年来大量研究结果表明lncRNA在肿瘤的发生发展中起到了重要的作用。PTENP1作为抑癌基因磷酸酶和张力蛋白同源基因(PTEN)的假基因,与PTEN具有高度同源性。Yu等[3]发现在肾透明细胞癌中lncRNAPTENP1作为竞争性内源RNA通过竞争miR-21影响抑癌基因PTEN的表达而发挥抑癌功能。熊等发现PTENP1通过MAPK信号通路抑制肝癌细胞的增值及迁移。但目前国内外尚无关于PTENP1与胶质瘤相关性的研究,本课题拟先检测脑胶质瘤组织及正常脑组织PTENP1的表达情况,再建立过表达PTENP1的胶质瘤细胞株,并检测细胞的增殖、凋亡和迁移能力。【目的和方法】1、RealtimeRT-PCR法检测lncRNAPTENP1在胶质瘤组织及正常脑组织中的表达水平。收集13例新鲜胶质瘤组织标本及5例正常脑组织标本。运用RealtimeRT-PCR技术检测lncRNAPTENP1在胶质瘤组织及正常脑组织中的表达水平。2、构建lncRNAPTENP1过表达载体,将其转染至胶质瘤细胞株中,RealtimeRT-PCR方法检测PTENP1过表达载体的转染效率,过表达PTENP1后检测PTENP1对胶质瘤细胞生物学特性的影响。应用CCK8法检测PTENP1过表达对SHG44、U251细胞增殖能力的影响;采用Transwell实验测验PTENP1过表达对胶质瘤细胞株侵袭能力的影响;并应用细胞划痕实验检测细胞的迁移能力。【结果】1、RealtimeRT-PCR法检测结果显示,胶质瘤组织中lncRNAPTENP1含量明显低于正常脑组织,其差异具有统计学意义(P<0.05)。2、成功构建lncRNAPTENP1过表达载体pcDNA-PTENP1,并稳定地转染到SHG44、U251胶质瘤细胞中。RealtimeRT-PCR结果显示与对照组比较,SHG44、U251组胶质瘤细胞转染lncRNAPTENP1过表达载体后lncRNAPTENP1的表达明显上调(P<0.05)。3、过表达lncRNAPTENP1后,CCK8法检测显示24、48、72小时,SHG44lncRNAPTENP1、U251lncRNAPTENP1组细胞的增殖率均显著低于对照组(P<0.05),且随着时间推移,增殖程度逐渐下降。transwell侵袭实验检测结果显示,在SHG-44及U251细胞中过表达lncRNAPTENP1组穿过Matrigel膜的细胞数较对照组明显减少(P<0.05)。划痕实验结果显示,在SHG-44及U251细胞中过表达lncRNAPTENP1可以抑制细胞迁移(P<0.05)。【结论】(1)lncRNAPTENP1在已检测的胶质瘤标本及细胞系中均表达下调。(2)过表达lncRNAPTENP1能减弱胶质瘤细胞在体外的增值、侵袭及迁移能力,提示lncRNAPTENP1可以负性调节体外胶质瘤细胞的恶性生物学行为;初步证实了lncRNAPTENP1可能是一个新的胶质瘤抑癌基因。综上所述,我们可以将lncRNAPTENP1作为新的胶质瘤诊断标志物,并有望成为胶质瘤基因治疗的新靶点。