论文部分内容阅读
目的调节性T细胞(CD4~+CD25~+ regulatory T cell，Treg)是近年来鉴定的一种新型免疫抑制细胞，它具有免疫无能性和免疫抑制性两大特征，被认为是迄今为止所发现的最重要的免疫抑制细胞。多种肿瘤患者外周血和肿瘤局部Treg细胞明显增加，在肿瘤免疫耐受中发挥重要作用。树突状细胞(dendritic cell，DC)是目前已知的功能最强的抗原提呈细胞，因其强大的抗原递呈功能和激活抗原特异性的CTL(cytotoxic T lymphocytes CTL)反应，成为肿瘤生物免疫治疗的重要载体。但DC的上述作用依赖于其成熟、表达的MHC-Ⅰ、Ⅱ类分子及协同刺激分子B7-1、B7-2和CD40等，其中B7分子可与CD28和CTLA-4结合，前者促使T细胞活化，而后者则使T细胞无能。本研究旨在探讨CD4~+CD25~+Treg细胞对DC免疫抑制的影响及可能机制。方法应用免疫磁珠分离获得CML患者和健康人Treg细胞。采集CML患者和健康人骨髓分离获得单个核细胞(BMMNC)，培养得到DC细胞。实验分组：实验组A：CML-Treg+CML-DC±CTLA-4单抗，实验组B：CML-Treg+Normal-DC±CTLA-4单抗；对照组C：Normal-Treg+Normal-DC，对照组D：Normal-Treg+CML-DC。应用流式细胞仪检测各组Treg细胞CTLA-4的表达及DC表型CD1a、CD40、CD3、HLA-DR及CD80、CD86等。观察加入抗CTLA-4单抗后实验组DC表面标志CD80、CD86表达的变化，应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测Treg细胞因子IL-10和TGF-β水平。结果应用免疫磁珠分选所得CD4~+CD25~+Treg细胞，经流式细胞术检测其纯度为85％～94％。CML患者外周血Treg细胞CTLA-4阳性表达率为52.4％，健康人为33.2％。与加入Treg前相比，实验组和对照组DC表型CD80、CD86均明显减低(P＜0.05)。当实验组(A、B)加入CTLA-4单抗后，DC标志CD80、CD86表达又复上调(P＜0.05)。ELISA检测结果表明：IL-10和TGF-β水平在实验组表达最高，分别为629.22±124.04 pg／ml、581.47±109.21 pg／ml，明显高于对照组(p＜0.05)。结论CML患者外周血CD4~+CD25~+Treg的数量较健康人高，其CTLA-4阳性表达率也较健康人高，说明Treg与CML免疫耐受机制有关，Treg可能参与了CML的发生发展。Treg细胞下调共刺激分子CD80、CD86的表达，CTLA-4单抗能对抗这一作用。所以CTLA-4与B7分子(CD80、CD86)通路可能是Treg影响DC的关键途径，选择性抑制CTLA-4有望增强DC的功能。本研究为CTLA-4作为抗肿瘤靶点提供了新的依据，为提高DC功能以及DC肿瘤疫苗的应用提供了一条新策略和新途径。