【摘 要】
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类胡萝卜素是一类在自然界中广泛存在的具有多种生理功能的天然色素物质,靠化学合成和从植物中提取远远不能满足需要。随着类胡萝卜素合成基因不断被克隆出来,生物合成类胡萝
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类胡萝卜素是一类在自然界中广泛存在的具有多种生理功能的天然色素物质,靠化学合成和从植物中提取远远不能满足需要。随着类胡萝卜素合成基因不断被克隆出来,生物合成类胡萝卜素的方法越来越彰显出强大的生命力。而三孢布拉霉作为工业上常用的类胡萝卜素生产菌株,其类胡萝卜素产量是很高的,但也存在正负菌分开培养等问题。本文通过向酿酒酵母中导入三孢布拉霉类胡萝卜素合成基因,利用宿主自身的MVA途径提供前体物质,使之能够生产类胡萝卜素,并尝试了carRA双功能酶的拆分工作。具体工作如下：1、将类胡萝卜素合成基因构建到重组载体上,导入到宿主中,打通类胡萝卜素代谢通路,从而获得产类胡萝卜素重组菌；2、构建包含限速酶的重组载体,提高类胡萝卜素产量。将ipi, ggps, tHMGR基因连接到载体中,导入到宿主中,获得pyAB/prG, pyAB/prGI, pyAB/prGIT重组菌；3、对获得的重组菌进行发酵,测定p-胡萝卜素产量。其中获得的产量最高为697.6μg/gDCW;4、研究双功能酶carRA,尝试拆分。将双功能酶carRA两个具有不同酶活性的独立的结构域进行拆分,将带有八氢番茄红素合酶活性的基因连接载体上,导入到酿酒酵母中。另外,还分析了双功能酶carRA的疏水性,将具有八氢番茄红素合酶活性的基因片段加入了一段可以锚定在酿酒酵母膜上的信号肽,然后连接到载体上,导入到酿酒酵母中,观测活性。
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