背景：皮肤作为人体外在浅表的器官,从皮肤的衰老状态能够体现出整个机体的衰老状态,同时也是判断人体衰老程度的最直观的参考指标。而皮肤光老化是日常中最容易发生,同时也是最需要预防和治疗的。皮肤光老化是指日光中的紫外线长期辐射损害并长期积累导致皮肤衰老的过程。紫外线辐射会使皮肤变得粗糙、失去光泽,产生皱纹,长期积累会发生真皮炎症反应,激活血管周围的巨噬细胞、肥大细胞,细胞因子及炎性递质可导致组织溶解酶如胶原酶、弹性蛋白酶等的释放,从而缓慢地溶解真皮中的成分,更严重的会导致皮肤发生病变如皮肤癌。长期的紫外线照射会使皮肤过早的发生老化,从而叠加形成实质性的老化。但是并非所有的光老化是相等的,该过程受到皮肤类型和种族的影响,同时光老化的程度还取决于地理位置、从事的职业、生活方式及采用的保护措施(包括使用防晒霜及遮阳衣等)等。普遍来说,人们受到社会、文化及个人价值观的影响,非常注重关心自己的外观,虽然每个人的审美观不同,但是拥有青春的外表是一个永恒的标准。而光老化的程度在判断是否保留青春中扮演着重要的作用。因此,在世界各地如何延缓皮肤老化己成为一个重要的科学问题。根据中医基础理论,痰形成后,内而脏腑,外达皮肉筋骨,使脏腑失养,生理功能衰退,代谢失常,进而加快衰老进程,因此化痰己成为延缓皮肤衰老的重要制法之目前,探讨延缓皮肤光老化药物多从抗氧化方面进行,较少提及其他方面,本文将从非酶糖基化反应及分子水平探讨化痰类代表中药陈皮的提取物对皮肤光老化的作用。目的：1、观察陈皮提取物对皮肤光老化裸鼠背部皮肤组织病理学及羟脯氨酸(Hyp)、醛糖还原酶(AR)含量、非酶糖基化终端产物(AGEs)的影响；2、观察陈皮提取物对皮肤光老化裸鼠背部皮肤P16蛋白表达的影响；3、观察陈皮提取物经皮透过液对光老化皮肤成纤维细胞存活率及β-半乳糖苷酶表达的影响；4、观察陈皮提取物经皮透过液对光老化皮肤成纤维细胞周期及凋亡的影响。方法：1、SPF级雌性balb/c裸鼠随机分为正常组、模型组、维生素E组(5g/g)及陈皮提取物高(1g/g)、低剂量组(0.5g/g)五组。采用UVA、UVB紫外照射灯建立裸鼠皮肤光老化模型。连续8周,给药组于造模同时给予裸鼠背部涂布给药,8周末,取背部皮肤,在光学显微镜下观察各组裸鼠背部皮肤的病理组织结构(HE染色、Masson染色、醛品红染色)；比色法检测背部皮肤组织羟脯氨酸(Hyp)的含量；Elisa法测定背部皮肤非酶糖基化终产物(AGEs)及醛糖还原酶(AR)的活性；Western Blot法检测背部皮肤P16蛋白的表达。2、采用贴块法提取SPF级SD乳大鼠背部皮肤成纤维细胞,取第4-7代皮肤成纤维细胞进行实验,分为正常组、模型组、维生素E组(0.0lg/m1)、维生素E组(0.05g/mL)及陈皮提取物经皮透过液高(100mg/mL)、中(50mg/mL)、低剂量组(25mg/mL)七组。采用MTT法测定皮肤成纤维细胞存活率；β-半乳糖苷酶染色法观察皮肤成纤维细胞衰老情况；流式细胞术检测皮肤成纤维细胞周期变化及凋亡情况。结果：1、裸鼠一般行为学、背部皮肤组织病理学结构的改变 正常组裸鼠皮肤表面细腻光泽无皱纹,皮肤薄且滋润有弹性；模型组裸鼠体型瘦小,皮肤明显增厚,肤色暗淡光泽度差,有明显的粗深皱纹,表现为典型的皮肤光老化现象；维生素E组和陈皮高、低剂量组裸鼠皮肤均有不同程度的增厚、光泽度欠缺、皱纹产生及损伤红肿等,但均较模型组有所改善。光镜显示：裸鼠背部皮肤病理组织切片染色结果可见正常组裸鼠皮肤组织结构完整,厚度正常,表皮层与真皮层分界清楚,真皮层可见波浪状胶原纤维组织,呈天蓝色且染色较深,分布均匀,排列规则有序且紧密有致,弹性纤维轮廓清晰,交织成网状,形态细长而规则；模型组裸鼠可见表皮角化过度明显,表皮明显增厚,分层不清,腺体明显减少,真皮层细胞减少且排列混乱,血管扩张明显,部分充血,有明显的淋巴细胞和嗜酸性粒细胞浸润,胶原纤维染色不均且颜色浅,疏散、部分增粗或结合呈团块、排列不规则,弹性纤维数量减少,大部分成断裂状且无轮廓边界,粗短扭曲,部分浓染；陈皮高、低剂量组均改善了光老化裸鼠皮肤的病理组织结构,其中高剂量组效果为佳。2、各组裸鼠背部皮肤Hyp、AGEs、AR的含量变化及P16蛋白的表达模型组裸鼠背部皮肤Hyp较正常组表达减少(P<0.05),AGEs较正常组表达增加(P<0.05),AR较正常组表达无明显差别,P16蛋白表达较正常组表达增强(P<0.05),而陈皮提取物可以显著提高Hyp含量(P<0.05)且有减少AGEs活性的趋势(P<0.05)、降低P16蛋白的表达(P<0.05),但对AR的表达均无明显影响。3、陈皮提取物经皮透过液对皮肤成纤维细胞存活率影响正常组皮肤成纤维细胞存活率高,细胞间排列紧密,细胞形态呈细长纤维形；而模型组经紫外线照射后,存活率明显降低(P<0.05),出现萎缩、变圆,胞浆中可见黑色小点,悬浮细胞增多；维生素E组及陈皮高、中、低剂量组悬浮及萎缩皮肤成纤维细胞都有不同程度的减少,且大部分细胞形态饱满呈梭形,其中以陈皮高剂量组效果最优。4、陈皮提取物经皮透过液对皮肤成纤维细胞凋亡及周期的影响正常组皮肤成纤维细胞凋亡率为4.91%,而皮肤成纤维细胞经紫外线照射后凋亡率为44.97%,细胞凋亡数量明显增加,经不同药物不同浓度处理后,可见细胞凋亡率均有不同程度的下降,其中以100mg/ml陈皮经皮透过液效果最优；各组皮肤成纤维细胞SubGl期细胞有减少的趋势。结论：1、动物模型病变特点：模型组裸鼠在行为学上表现出明显的皮肤光老化症状：外观上皮肤出现明显的深粗皱纹,光泽度减少；病理组织学上皮肤表皮明显增厚,真皮层中成纤维细胞减少,胶原纤维疏散,弹性纤维断裂或聚集,表明裸鼠皮肤光老化模型复制成功。而陈皮提取物能有效地改善皮肤光老化症状、减少粗深皱纹的产生、通过对胶原纤维及弹性纤维的保护,增加羟脯氨酸在皮肤中的含量,减少非酶糖基化终端产物及衰老相关蛋白P16的表达,同时减少真皮成纤维细胞因紫外线照射的凋亡,从而达到抵抗皮肤光老化的作用。2、非酶糖基化特征：非酶糖基化对皮肤衰老的影响主要是通过对胶原纤维和弹性纤维作用而实现。随着非酶糖基化终端产物的增加,可以下调胶原纤维的合成和促进其降解,而羟脯氨酸是真皮内含量丰富而且比较稳定的氨基酸,真皮层中胶原纤维的含量变化可以通过羟脯氨酸的含量多少直接的反应出来；与此同时弹性纤维中的弹性蛋白与细胞外液中的葡萄糖发生非酶糖基化而形成非酶糖基化终端产物,使弹性纤维发生断裂、交联聚集,弹性消失,最终导致皮肤衰老。目前,关于非酶糖基化反应在皮肤光老化中的作用机制及相关治疗药物的报道在国内外均比较少见。3、成纤维细胞衰老特征：皮肤由真皮和表皮组成,其中真皮的衰老在皮肤衰老中起着至关重要的作用,因此真皮成纤维细胞的衰老对皮肤的衰老起着关键作用,而对皮肤成纤维细胞中的衰老相关遗传基因的表达研究及皮肤成纤维细胞的凋亡情况研究是对细胞老化的研究的主要方面。细胞衰老主导基因P16在衰老过程中有P16蛋白质的积聚,在复制衰老时多呈高表达,同时,细胞凋亡在维持细胞的增值和细胞的丢失之间起着非常重要的平衡作用,过度的凋亡容易引起退行性变和老年性疾病等多种衰老现象,在紫外线应激的诱导下,真皮中的成纤维细胞容易发生凋亡现象,从而导致皮肤衰老的产生。4、陈皮提取物干预效应：陈皮提取物对皮肤光老化的干预机制可能是通过抑制非酶糖基化反应,降低AGEs、P16蛋白及升高Hyp含量,同时减少因氧化应激产生的细胞凋亡而实现的。