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土壤盐碱化对植物正常生长造成了严重影响,维持植物体内钾钠平衡,对提高植物耐盐性至关重要。近年来,对植物体内钾钠平衡的关键基因的研究也取得了一定进展,研究显示,植物对K+的吸收转运主要依靠钾离子通道和钾转运体两大转运系统。本研究以黑果枸杞为材料,基于课题组前期的黑果枸杞盐胁迫下的转录组数据,通过同源基因克隆,获得两个响应盐胁迫的基因LrSKOR和LrKUP8。其中LrSKOR的编码区全长2448 bp,是一个亲水性外整流钾离子通道基因;LrKUP8的编码区全长2316 bp,是一个低亲和性钾转运体。本研究通过表达分析、载体构建、亚细胞定位、同源转化等研究方法,分析了两个耐盐基因的功能,主要研究结果如下:1.组织表达显示:在长时间中等浓度的盐胁迫下,两个基因在不同器官中的相对表达量从高到低依次为新叶、老叶、老茎、新茎;在短时间高浓度的盐胁迫下,两个基因在叶中的相对表达量均表现为先下降后上升。2.亚细胞定位结果显示:LrSKOR和LrKUP8均定位在细胞质膜上,这为进一步揭示两个目的基因的功能奠定了基础。3.黑果枸杞愈伤获得及转化:以黑果枸杞叶片作为外植体消毒并诱导愈伤,通过转化愈伤,成功获得了转化 pBI121-GFP 空载体、pBI121-LrSKOR-GFP、pBI121-LrKUP8-GFP的转基因愈伤。4.转基因愈伤盐处理及分析显示:转化两个目的基因的转基因愈伤均通过抑制了Na+的内流及K+的外排从而维持了更高的钾钠比,从而增加了黑果枸杞的耐盐性。5.黑果枸杞愈伤再分化体系探索:获得了一种较适宜SY3基因型愈伤分化的培养基:MS+KT 1.0 mg/L+6-BA 0.4 mg/L+NAA 0.1 mg/L。6.黑果枸杞叶片转化:以黑果枸杞叶片为材料进行了两个目的基因的遗传转化,获得了部分抗性苗,其中有两株转化LrKUP8的Gemd2基因型已生根。本研究首次在黑果枸杞中克隆得到两个与盐碱胁迫调控相关的基因LrSKOR和LrKUP8,分析了两个基因在不同盐胁迫下的表达情况。后通过构建重组载体,发现两个基因均定位在细胞质膜,且首次通过直接转化黑果枸杞愈伤,获得了黑果枸杞转基因愈伤,并对转基因愈伤进行了不同的盐胁迫处理及分析,发现两个基因均能通过抑制Na+内流及K+外排从而维持了更高的钾钠比。且探索了农杆菌介导的叶盘转化法在枸杞中的应用,通过直接转化黑果枸杞叶片,获得了部分抗性苗。该研究对将来的植物分子育种、抗逆新品种培育提供了重要的基础材料,相关研究具有重要的理论和实践意义。