目的:1.探讨温肾方对哮喘小鼠气道炎症的调节作用。2.探讨温肾方通过IL-33/ST2通路对哮喘固有免疫细胞ILC2和DC的调节作用。3.探讨“肺肾相关”、“隐性虚损”的中医理论与免疫调节系统的关系,以补充温肾法在哮喘中的治疗依据,为中医药防治哮喘提供新的靶点。方法:动物实验:30只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、IL-33组、西药组(PRE)、温肾方组(WSF)、中西医结合组(CO),每组6只,除正常组外,其余4组用IL-33(0.5μg/50μl)滴鼻,连续滴鼻6天。西药组、中药组和中西结合组均在造模前1-2 h灌胃给药,其中中药组和中西结合组的中药在造模前1周开始给药,正常对照组和IL-33组用PBS灌胃对照。在末次滴鼻结束24h内检测小鼠气道阻力;摘眼球取血后,单侧结扎,进行单侧肺组织灌洗,检测肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞分类计数;采用HE染色检测小鼠病理变化;流式细胞术检测肺组织中ILC2表达和脾脏IFN-γ的表达;RT-PCR检测肺组织中ST2,ICOS,RORα的m RNA表达;ELISA检测BALF中IL-4,IL-5,IL-13和血清Ig E的水平。细胞实验:从骨髓中分离培养树突细胞,收集培养至第8天的细胞,预先用温肾方干预1h,再用LPS刺激24h。流式细胞术检测DCs表面MHC-II、CD80、CD86的表达;ELISA检测DCs分泌的IL-6,IL-12,TNF-α细胞因子的水平;RT-PCR检测DCs中IL-33的m RNA表达;western-blot检测DCs中IL-33蛋白的表达。结果:动物实验:气道阻力检测:温肾方在吸入Mch 12.5mg/ml时能明显下调哮喘小鼠的气道阻力(P<0.05),其中以中西结合组下调的最为明显;温肾方可以明显下调BALF中白细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞的数量(P<0.05);HE染色可见温肾方可以减轻支气管管壁厚度,减少管壁周围的炎症细胞浸润,尤以中西结合组改善最为明显;温肾方组可明显下调BALF中IL-4,IL-5,IL-13的水平和血清中Ig E的水平(P<0.01);温肾方可以下调ILC2的数量(P<0.05),温肾方组可明显下调肺组织中ICOS,ST2,RORαm RNA的表达(P<0.01)。细胞实验:温肾方不同浓度剂量0.5 mg/ml,1 mg/ml,2 mg/ml均可下调TNF-α的表达(P<0.05),且呈浓度梯度下降的趋势;温肾方1 mg/ml,2 mg/ml均可下调IL-12和IL-6的表达(P<0.05)。温肾方对DCs表面MHC-II、CD80、CD86的表达无明显下调作用(P>0.05);温肾方可以下调DCs中IL-33蛋白和m RNA的表达。结论:1.温肾方可以降低IL-33诱导的哮喘小鼠的气道高反应性,减轻小鼠的气道炎症。2.温肾方可以抑制固有免疫细胞ILC2的数量和功能,减轻气道炎症反应,延缓哮喘的进程。3.温肾方可以抑制DC的分泌炎症细胞因子,下调自身分泌的IL-33。4.温肾方对ILC2和DC的调节作用与抑制IL-33/ST2通路相关。