背景生物分析在临床诊断、法医鉴定、食品检测及新药研发等诸多方面都具有重要意义。但是,生物分析因目标物含量少、杂质多,因而开发新型的高灵敏检测手段十分必要。G碱基荧光探针具有与结构简单、与目标物反应速度快、空间位阻小、成本低易于制备的优点。本研究以G碱基荧光探针所构建的信号放大体系为例,通过建立背景低、特异性好、易于制备的低成本高灵敏的分析方法,构建一系列生物分子的检测体系,为癌症及相关基础研究提供新思路和新方法。目的(1)构建基于G碱基的高灵敏荧光探针用于MAC核酸的信号放大检测;(2)构建基于G碱基的荧光探针用于凝血酶的信号放大检测。(3)构建基于G碱基的荧光探针用于肿瘤标志物的免疫分析。方法(1)利用MAC核酸中保守序列的重复C碱基构建出G碱基荧光探针,当目标核酸存在时,诱导核酸外切酶三的循环放大反应,从而实现对目标核酸的检测;(2)通过适配子技术,将G碱基核酸探针与核酸聚合酶诱导的信号放大相结合,从而构建凝血酶的高灵敏检测方法。(3)将G碱基荧光探针与免疫分析技术相结合,构建肿瘤标志物PSA的检测,并将方法用于血清样品中。结果(1)基于G碱基的荧光探针检测MAC核酸时在浓度在10~600 pM时呈现良好的线性关系,检测限可低至8.46 pM;(2)基于G碱基的荧光探针检测凝血酶的线性范围是20~250 pM,检测限为14.25 pM,在复杂样品中也可呈现良好的检测结果。(3)基于G碱基荧光探针与免疫分析技术的荧光传感器检测肿瘤标志物PSA的线性范围是20~300 ng/ml,在血清样品中的回收率约104%—107%。结论(1)基于G碱基的荧光探针检测MAC核酸方法具有更低的检测背景从而具有更好的检测灵敏度;(2)基于G碱基的荧光探针用于凝血酶的信号放大检测方法能够较好的检测到复杂样品中凝血酶的含量,方法具有良好的选择性和灵敏度。(3)基于G碱基荧光探针与免疫分析技术能够较好的克服血清样品中其他杂质的干扰和影响,而且探针核酸具有很好的通用性,能够直接用于其他相关物质的免疫分析中。