本文以汉坦病毒灭活疫苗(流行性出血热疫苗)和DNA疫苗为研究模型，综合考虑疫苗类型、免疫间隔、免疫剂量等因素并采取不同的免疫方案，通过动物实验对疫苗免疫后免疫应答时间、效果的影响进行探讨，旨在初步阐明灭活疫苗和DNA疫苗诱导的免疫保护在时间、效果等方面的差异，并选择汉坦病毒DNA疫苗，进一步探讨了其加速汉坦病毒疫苗产生免疫保护的策略及其机制，探索建立快速免疫的基础理论和方法。全文包括三大部分： 第一部分：以汉坦病毒灭活疫苗(流行性出血热疫苗)和DNA疫苗为研究模型，采取不同免疫方案(免疫间隔、免疫剂量)对汉坦病毒灭活疫苗和DNA疫苗两种疫苗免疫后诱导免疫应答产生的时间、免疫保护效果等进行了探讨。两种疫苗均采用肌肉注射途径免疫小鼠，设立间隔1周快速免疫和间隔2周常规免疫两种免疫方案，DNA疫苗为表达汉滩病毒84Fli株核蛋白与糖蛋白的pcDNA3.0/S和pcDNA3.0/M两种质粒等量混合，分为小剂量(20μg)、中剂量(50μg)和大剂量(100μg)三种不同剂量免疫组。本研究完成了汉坦病毒灭活疫苗、汉坦病毒DNA疫苗不同剂量快速免疫和常规免疫方案的免疫效果评价，发现汉坦病毒灭活疫苗快速免疫方案能够更快的诱导小鼠产生较强的体液免疫应答；汉坦病毒DNA疫苗大剂量(100μg)免疫较小剂量(20μg)和中剂量在诱导体液免疫应答方面的效果最好；与灭活疫苗快速免疫组相比，DNA疫苗大剂量免疫组能够较快的诱导小鼠产生较强的体液免疫应答；两种疫苗均能有效诱导小鼠产生中和抗体，但DNA疫苗在诱导细胞免疫应答方面具有显著的优势；汉坦病毒DNA疫苗大剂量免疫以及间隔1周的快速免疫方案在加速汉坦病毒疫苗诱导产生免疫保护方面具有明显的优势。 第二部分：根据抗原呈递细胞(APCs)靶向策略，选择与APCs表面。B7配体具有很高的亲和力的细胞毒T淋巴细胞相关抗原4胞外区结构域(extra-domain of cytotoxic T lymphocyte-associated antigen 4，eCTLA4)，构建了表达eCTLA4与汉滩病毒84Fli株病毒核蛋白(NP)或糖蛋白(GP)融合蛋白的抗原靶向性嵌合DNA疫苗载体pcDNA3.0/eCTLA4-S和pcDNA3.0/eCTLA4-M(pCMS)，并联合应用CpG motifs佐剂，进一步探讨eCTLA-4和CpG motifs加速汉坦病毒核酸疫苗产生免疫保护的效应。实验中采用了不同的免疫方案：pcDNA3.0/S和pcDNA3.0/M联合CpG佐剂组(pMS+CpG组)；pcDNA3.0/S和pcDNA3.0/M组(pMS组)；pcDNA3.0/eCTLA4-S和pcDNA3.0/eCTLA4-M联合CpG佐剂组(pCMS+CpG组)；pcDNA3.0/eCTIA4-S和pcDNA3.0/eCTIA4-M组(pCMS组)。本研究通过对不同免疫方案DNA疫苗免疫保护效果的评价，发现eCTLA-4靶向与CpG motifs联合免疫组(pCMS+CpG组)能有效诱导小鼠产生汉坦病毒特异性的体液免疫及细胞免疫反应，而且无论在特异性体液免疫应答产生的时间和强度以及细胞免疫水平方面都要显著优于其它实验组(p<0.05)；pCMS免疫组与无eCTLA-4靶向的pMS免疫组相比，小鼠的细胞免疫水平明显增强；体液免疫方面，pCMS免疫组与无eCTLA-4靶向的两个免疫组(pMS，pMS+CpG)相比，初次免疫后体液免疫应答虽然发生早，但在加强免疫后三组之间无显著性差异。研究证实eCTLA-4靶向及CpG motifs佐剂的联合免疫策略能够有效加快及增强DNA疫苗诱导小鼠产生的体液免疫和细胞免疫反应，两者具有协同作用。 第三部分：为了进一步探讨eCTLA4靶向效应加快汉坦病毒DNA疫苗产生免疫保护的作用机制，借助体外定向诱导获得了小鼠树突状细胞(DCs)，然后通过DCs结合实验(binding assay)对eCTLA4的靶向效应进行了初步的探讨和验证。将pcDNA3.0/eCTLA4-S和pcDNA3.0/S质粒转染293T细胞，收获细胞总蛋白，然后将含有eCTLA4-NP融合蛋白或NP的蛋白样品分别在低温环境与树突状细胞进行结合实验，经过间接免疫荧光反应后进行FACS分析。研究发现eCTLA4-NP融合蛋白与。DCs结合效率(40％)显著高于NP(10％)。DCs结合实验的结果进一步支持了eCTLA4的靶向效应加快汉坦病毒DNA疫苗产生免疫保护的作用机制。 本研究以汉坦病毒灭活疫苗和DNA疫苗为研究模型，通过对汉坦病毒疫苗不同免疫方案的免疫保护效果研究、eCTLA-4和CpG motifs加速汉坦病毒DNA疫苗免疫调节作用研究以及eCTLA-4对汉坦病毒DNA疫苗免疫调节作用机理的初步探讨，初步阐明汉坦病毒DNA疫苗大剂量免疫以及间隔1周的快速免疫方案在加速汉坦病毒疫苗诱导产生免疫保护方面具有明显的优势，并通过eCTLA4靶向与CpG motifs佐剂联合应用策略，进一步探讨了加速汉坦病毒核酸疫苗产生免疫保护的策略，证实了eCTLA-4靶向/CpG motifs联合免疫策略加快及增强汉坦病毒DNA疫苗诱导产生免疫保护的可行性和有效性，并借助。DCs结合实验初步探讨和验证了eCTLA4的靶向效应加快汉坦病毒DNA疫苗产生免疫保护的作用机制。