胃癌患者外周血单个核细胞免疫球蛋白样转录子3的表达及临床应用研究

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胃癌是当今社会最高发的恶性肿瘤之一,预后和早期诊断效果较差,大多数患者一经发现已达到晚期。目前胃癌的治疗仍以手术联合综合治疗为主,虽然放化疗均取得一定进展,但由于胃癌较高的远处转移率和难以控制的局部肿瘤生长,生存率未见明显提高。近年来,肿瘤免疫逃逸被认为是肿瘤发生发展过程中的重要环节,因此,寻找并研究参与免疫逃逸过程的抑制性分子成为胃癌治疗新的研究方向。免疫球蛋白样转录子3(ILT3)是免疫球蛋白超家族的一员,胞内含有长胞质尾区,包含假定的免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM),用于募集酪氨酸磷酸激酶SHP-1和SHP-2向细胞内传递抑制性信号,因此被认为是一种抑制性受体。已有研究证实,ILT3主要表达于树突状细胞(DC)和巨噬细胞,在移植耐受自身免疫性疾病方面有重要的免疫抑制作用。目前已有研究发现,ILT3在胰腺癌细胞及恶性黑色素瘤细胞中高表达,而且与癌症的进展有一定联系,也参与了肿瘤的免疫逃逸,但胃癌患者外周血中ILT3的表达和意义还不明确。本文通过研究ILT3在胃癌患者外周血单个核细胞及T细胞亚群的表达,初步探讨ILT3表达与胃癌发生发展的关系,为进一步研究胃癌的诊断和治疗提供一定的帮助。目的通过检测胃癌患者PBMC以及T细胞亚群中ILT3的表达,研究ILT3在胃癌发生发展过程中的作用和意义方法一.临床实验:实验分组包括胃癌患者组,健康对照组。其中患者组来自山东大学齐鲁医院普通外科确诊的病人;从山东大学齐鲁医院的健康体检中心的体检人员中选择部分健康人作为健康对照组。荧光定量PCR方法用于对80例胃癌患者和40例健康对照者PBMC中ILT3的mRNA水平进行检测,然后结合临床病理特点分析其与胃癌临床病例特点之间有无关系。同时采用流式细胞术检测胃癌患者及健康对照者外周血T淋巴细胞亚群中ILT3的表达并分析其在胃癌的发生发展和临床诊断中的作用。二.体外实验:1.分别用浓度为50,100,200ng/L的IL-10刺激从健康人外周血中分离的外周血单个核细胞,并培养8h,12h,24h后,采用荧光定量PCR和流式细胞术,分别检测IL-10刺激前后PBMC抑制性受体ILT3mRNA和蛋白的表达;2.选择经浓度为50ng/L的IL-10处理24h前后的PBMC分别与不同分化程度的胃癌细胞SGC-7901和BGC-823共培养,采用CCK-8检测IL-10处理前后PBMC对胃癌细胞SGC-7901和BGC-823的杀伤活性变化。结果一.临床实验:1.荧光定量PCR分析结果显示,胃癌患者组PBMC中ILT3mRNA相对表达量(8.465±0.674)显著高于健康对照组(6.234±0.556),并且ILT3在PBMC中的表达与肿瘤分化程度和肿瘤浸润深度有关,与性别,年龄,肿瘤大小及淋巴结转移无关。其中低分化型与中高分化型胃癌患者相比较,PBMC中ILT3mRNA相对表达量差异具有统计学意义(t=4.802;P<0.01);胃癌侵及深肌层与未侵及深肌层的患者相比较,PBMC中ILT3mRNA相对表达量差异亦有统计学意义(t=5.971;P<0.01)。2.用ROC曲线评价ILT3对胃癌的诊断价值,敏感性为0.933,特异性为0.675,曲线下面积为0.760(P<0.05)。3.流式细胞术分析结果显示,ILT3蛋白在胃癌患者组CD3+CD4+和CD3+CD8lowT细胞亚群中都有高表达,显著高于健康对照组,差异具有统计学意义。其中胃癌组CD3+CD4+和CD3+CD81owT细胞亚群中ILT3阳性细胞百分率分别为29.93%±1.269%和75.53±2.200%,而健康对照组CD3+CD4+和CD3+CD81owT细胞亚群中ILT3阳性细胞百分率分别为7.671±1.032%和12.83±0.940%。二.体外实验:1.IL-10可上调PBMC中ILT3mRNA的表达,且上调幅度与处理时间,药物浓度有关。其中经50ng/L的IL-10处理24h后,PBMC中ILT3mRNA表达显著升高,各时段差异显著(P<0.05),且随时间不断延长,ILT3mRNA表达明显升高;浓度为100ng/L,200ng/L的IL-10处理PBMC时,虽较对照组有所升高,但各时段差异不大,无统计学意义。2.IL-10可上调T细胞亚群中ILT3蛋白的表达,其中经50ng/L的IL-10处理PBMC24h后,ILT3蛋白在CD3+CD4+和CD3+CD81owT细胞亚群中表达显著升高。3.经浓度为50ng/L的IL-10处理24h后,由于PBMC中ILT3的表达上调,PBMC对胃癌细胞系BGC-823和SGC-791的杀伤效率较IL-10处理前明显下降,差异具有统计学意义。结论1.胃癌患者和健康对照者外周血中均有ILT3的表达,但胃癌患者ILT3表达显著增高,并且与患者肿瘤细胞分化和浸润程度有关。2.ILT3在肿瘤细胞CD3+CD4+和CD3+CD8lowT细胞亚群中的表达增强,提示其可能诱导T细胞分化,参与肿瘤免疫逃逸。3.IL-10可上调PBMC以及T细胞亚群中ILT3的表达,并通过ILT3参与对PBMC杀伤功能的调节,为探讨ILT3在胃癌中的作用机制以及胃癌的临床诊断和治疗提供一定的参考价值。综上所述,抑制性受体ILT3在胃癌的发生发展中具有重要作用,未来可以为胃癌的诊断和治疗带来新的希望。
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