论文部分内容阅读
目的目前关于孕期暴露拟除虫菊酯会导致胎儿宫内生长受限的人群研究已经有很多,动物实验的研究也已经证实,但是关于孕期暴露除虫菊酯会诱导胎儿宫内生长受限的关键时间窗研究还很少。本次研究选择了II型拟除虫菊酯的一种代表性物质氰戊菊酯(Fenvalerate,FEN),通过动物实验来研究孕期暴露FEN诱导胎儿宫内生长受限的关键时间窗,同时从胎盘角度探讨了氧化应激在其中的作用。通过此次研究,使孕期暴露拟除虫菊酯类物质对子代生长发育的影响的研究更深入了一步,具有重大的公共卫生学意义。方法通过动物实验建立不同孕期暴露FEN诱导胎儿宫内生长受限的模型。为探讨不同孕期母体暴露FEN对胎儿宫内生长的影响,将86只孕鼠分为6组。根据课题组之前的研究,暴露的剂量为20mg/kg,约为FEN的1/10 LD50。前期的初步数据显示,在怀孕期间给予FEN(20mg/kg)的小鼠中,未观察到母体毒性的迹象。课题组之前的研究发现,孕期暴露于FEN(20mg/kg)的小鼠的胎鼠出现IUGR。孕鼠随机分为三组,每组分为对照组和对照组。对照组和FEN组分别在妊娠早期(GD0~GD6)、中期(GD7~GD12)和晚期(GD13~GD17)每日灌胃玉米油或FEN(20mg/kg)。FEN或玉米油的体积为1毫升/100克体重。每天测量孕鼠的食物摄入量(每笼4只)和体重。所有孕鼠均在GD18剖杀取材。计算着床数、活胎、死胎和吸收胎数。分别对雄性胎鼠和雌性胎鼠的活胎称重。采用肛门生殖距离法对胎鼠进行性别鉴定。如果这种方法不能清楚地鉴定胎儿的性别,本次研究就通过子宫和睾丸来鉴定胎儿的性别。本研究通过评价对照组雌雄胎鼠体重分布进一步确定IUGR的阈值。体重小于全部胎鼠10%的胎鼠被指定为IUGR。分别对雌雄胎鼠的胎盘称重。由于只有孕晚期暴露于FEN才会导致胎鼠IUGR,因此本次研究只研究母体孕晚期暴露于FEN的胎鼠的胎盘机制。对胎盘进行HE染色,在显微镜下观察不同孕期FEN暴露对胎盘血窦面积的影响,胎盘组织匀浆后测量胎盘组织还原型谷胱甘肽(Glutataione,GSH)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的含量。免疫组化检测胎盘3-硝基酪氨酸(3-nitrotyrosine,3-NT)表达水平,用CD34~+标记胎盘血管密度,Western blot检测胎盘血红素加氧酶1(Heme oxygenase-1,HO-1)、血红素加氧酶2(Heme oxygenase-2,HO-2)的表达水平,RT-PCR检测胎盘诱导型一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase,iNOS)、核因子红细胞相关因子2(Nuclear factor erythroid-related factor2,Nrf2)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)、超氧化物歧化酶3(Superoxide dismutase,SOD3)、过氧化物酶1(Glutathione peroxidase 1,GPx1)、硫过氧化物酶(Peroxiredoxin-3,PRDX3)的mRNA表达水平。结果在不同组中的孕鼠在孕期的食物消耗没有显著差异。此外,孕鼠体重在母鼠孕期暴露FEN和对照组之间无差异。孕鼠体重增重在母鼠孕期暴露FEN和对照组之间无差异。在不同组中观察到每窝的吸收胎,死胎和活胎的数量没有显著差异。妊娠早期和中期孕鼠暴露FEN不影响胎鼠体重,但妊娠晚期孕鼠暴露FEN显著降低了胎鼠体重。进一步的分析表明妊娠晚期孕鼠暴露FEN的胎儿体重不仅在雄性胎鼠中显著降低,而且在雌性胎鼠中也显著降低。在不同妊娠阶段的孕鼠暴露FEN不影响胎鼠身长。在孕鼠妊娠晚期暴露FEN的胎鼠中IUGR的发生率显著增加。进一步的分析发现,妊娠晚期暴露于FEN的胎鼠IUGR的发生率不仅在雄性胎鼠中显著增加,而且在的雌性胎鼠的也显著增加。孕鼠在妊娠晚期暴露于FEN的胎盘层的血窦区域不仅在雄性胎鼠中显著降低,而且在雌性胎鼠中也显著减少。进一步分析了妊娠晚期孕鼠暴露FEN对胎盘迷路层CD34~+微血管密度的影响。孕鼠妊娠晚期暴露于FEN的雄性胎鼠和雌性胎鼠胎盘迷路层中的CD34~+微血管密度显著降低。妊娠晚期孕鼠暴露FEN对胎盘GSH和MDA的影响,孕鼠妊娠晚期暴露于FEN的雄性胎鼠和雌性胎鼠胎盘GSH水平显著降低。孕鼠妊娠晚期暴露于FEN的和雌性胎鼠胎盘MDA水平显着上升,但在雄性胎鼠中没有升高。孕鼠妊娠晚期暴露于FEN的雌雄胎鼠胎盘3-NT蛋白水平显著上升。在妊娠晚期暴露于FEN的孕鼠中,雄性和雌性胎鼠的胎盘iNOS mRNA的表达显著上调。在妊娠晚期暴露于FEN的孕鼠中,胎鼠胎盘Nrf2,SOD3和GPx1 mRNA表达与对照组相比没有显著差异。妊娠晚期暴露于FEN的孕鼠中,雌性胎鼠胎盘中CAT和PRDX3 mRNA表达水平上调。孕鼠在妊娠晚期暴露于FEN的雄性和雌性胎鼠胎盘的HO-1蛋白的水平表达显著增加。然而,孕鼠在妊娠晚期暴露于FEN的雄性和雌性胎鼠胎盘的HO-2表达与对照组相比无差异。结论妊娠晚期是FEN诱导的胎儿发生IUGR的关键时间窗。本次研究提供的证据表明,胎盘氧化应激至少部分参与了FEN诱导的胎盘损伤和胎儿IUGR的过程。