南红梨和杜梨多倍体诱导及鉴定

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‘南红梨’是‘南果梨’(Pyrus ussuriensis Maxim.)的一种红色芽变,其色泽鲜艳,果肉细腻,爽口多汁,风味香浓,但是与其他梨品种相比‘南红梨’果实偏小,影响了其商品价值。杜梨(Pyrus betulifolia Bunge)适应性强、喜光、耐寒、耐旱、耐涝、耐瘠薄,是北方梨树理想的乔化砧木。多倍体梨表现出生长势旺、产量高、器官巨大的优点,多倍体砧木嫁接植株后表现出树形较矮、抗逆性强等优点。多倍体育种是培育大果型梨品种与矮化抗逆梨砧木的重要方式。本研究以‘南红梨’与杜梨为材料,首先建立了‘南红梨’叶片再生体系,然后以‘南红梨’叶片和杜梨子叶为材料,经秋水仙素诱变后,创制了一批多倍体种质资源,为南红梨和杜梨改良奠定基础。主要研究结果如下:1.‘南红梨’叶片再生体系的建立本研究以‘南红梨’离体叶片为外植体,通过探究激素浓度、基本培养基种类、暗培养时间、叶片朝向对‘南红梨’叶片再生的影响,建立了‘南红梨’叶片再生体系。适宜‘南红梨’叶片再生的培养基为NN69+2.0 mg·L-1TDZ+0.4 mg·L-1NAA+20 g·L-1山梨醇+7 g·L-1琼脂,适宜‘南红梨’叶片再生的暗培养时间为20 d,适宜‘南红梨’叶片再生的叶片朝向为远轴面朝下。叶片再生率与平均再生芽数可达94.67%和3.58。2.‘南红梨’多倍体诱导及鉴定在‘南红梨’叶片再生体系的基础上,使用不同浓度的秋水仙素浸渍‘南红梨’叶片诱导‘南红梨’多倍体。适宜‘南红梨’多倍体诱导的秋水仙素浓度为0.2%,诱导率可达32.03%。筛选出最适宜‘南红梨’流式细胞术倍性鉴定的细胞核解离液为HEPES解离液,并使用流式细胞术对诱导出的不定芽进行倍性鉴定,最终得到95个‘南红梨’四倍体株系,编号为N-4-1至N-4-95。对诱导出的‘南红梨’四倍体进行观察与鉴定,与二倍体相比,‘南红梨’四倍体植株表现出叶片变厚、叶片面积增大、叶片表面皱缩、叶片颜色变深、气孔增大、气孔密度降低的特征。3.杜梨多倍体诱导及鉴定本研究以杜梨离体子叶为材料,使用不同浓度的秋水仙素浸渍杜梨子叶诱导杜梨多倍体。适宜杜梨多倍体诱导的秋水仙素浓度为0.1%,诱导率可达34.70%。筛选出最适宜杜梨流式细胞术倍性鉴定的细胞核解离液为HEPES解离液,并使用流式细胞术对诱导出的不定芽进行倍性鉴定,最终得到34个杜梨四倍体株系,编号为D-4-1至D-4-34。对诱导出的杜梨四倍体进行观察与鉴定,与二倍体相比,杜梨四倍体植株表现出叶片变厚、叶片面积增大、叶片形状改变、叶片颜色变深、气孔增大、气孔密度降低的特征。4.‘南红梨’与杜梨多倍体组培苗生根本研究以‘南红梨’、杜梨的二倍体与四倍体组培苗为材料,探索了‘南红梨’、杜梨的二倍体与四倍体组培苗适宜生根的激素浓度。适宜‘南红梨’二倍体生根的激素为0.2 mg·L-1NAA,适合‘南红梨’四倍体生根的激素为0.2 mg·L-1IBA。适合杜梨二倍体与四倍体生根的激素为0.2 mg·L-1IBA。对诱导出的‘南红梨’与杜梨根系进行形态学观察,NAA诱导的根系比IBA诱导的根系更加粗壮。
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