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目前快速诊断领域广泛应用的金胶免疫层析试剂条、酶联免疫试剂盒、以及正在迅速发展的生物芯片技术大多数是基于双抗夹心免疫模型研制的,它们都拥有抗原抗体的高特异性和高灵敏度,以及分析方法快速、简单、高通量、低成本等显著优点。为此,本论文就同一夹心免疫模型应用于以上三种分析方法开展了一系列的研究。 本论文采用柠檬酸三钠还原氯金酸的方法制备出颗粒均一、单分散性的金胶(GNPs),基于GNPs对生物大分子的静电吸附作用,将β-HCG(MabⅡ)抗体成功偶联于金胶表面形成GNPs-MabⅡ复合物,实验中调节金胶pH值和MabⅡ的标记量来优化复合物的性能。经过UV-vis、SEM、TEM等仪器表征,制备出稳定的、可应用于GICA的酒红色免疫金探针。 将上述制备的GNPs-MabⅡ复合物喷于结合垫上用来特异性结合样品中的HCG形成免疫复合物。α-HCG单克隆抗体(MabⅠ)固定于硝酸纤维素(NC)膜的检测区(T区)用来捕获标记有GNPs的免疫复合物。因此,当HCG存在时,GNPs将会在NC膜的T区聚集成肉眼可见的红色斑点。至于定量检测,样品浓度与T区红色斑点的灰度值线性相关,浓度在10~600 ng/mL范围内,灰度值-浓度对数值呈良好的线性关系。整个检测过程在15 min内完成且无需昂贵分析仪器进行定量分析。应用于人血清分析,可以达到临床检测要求。 大豆过氧化物酶具有耐热性能高、底物作用范围广、酸碱稳定性好、pH适用范围宽、原料廉价易得等优点;同时增强的化学发光分析方法比比色的ELISA灵敏度要高。我们希望研制SBP的酶标记增强化学发光试剂盒/生物芯片代替市面上广泛应用的辣根过氧化物酶(HRP)标记ELISA试剂盒。经ELISA实验验证,成功制备出可用于酶免实验的SBP-MabⅡ酶标抗体,酶和抗体最佳的偶联浓度比为1∶3。通过在Enspire多模式微孔板检测仪的初试,在SBP存在下,增强剂SPTZ和MORPH的加入可使化学发光增强近200倍,它们在Luminol-H2O2化学发光底物中最佳浓度分别为1.2 mM和0.6 mM。因此,SBP标记增强发光试剂盒/生物芯片的商品化生产具有切实可行的研究价值。