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核桃(Juglans regia)是重要的“木本粮油”生态树种,随着其集约栽培程度的不断提高和种植面积扩大,病害危害日趋严重,已成为核桃产业发展面临的严峻问题。本研究对山东核桃主要产区病害危害情况进行了调查,分离了核桃主要病害的病原,对分离的病原物通过形态学结合DNA分子检测进行了鉴定,并经接种实验,确定了核桃主要病害的病原。主要结果如下:1.山东省核桃主要病害:通过2009-2010年在山东农业大学林学实验站、山东省泰安市邱家店绿园经济林研究所、山东省济宁市汶上金昙核桃研究所、山东省临沂市费县芍药乡核桃种植区的定点调查,山东省目前核桃主要病害按严重程度依次为核桃炭疽病、黑斑病、溃疡病、枯梢病和褐色顶端坏死病。2.核桃炭疽病(Walnut anthracnose):核桃炭疽病主要危害果实,同时还危害叶片、嫩梢。本研究从炭疽病病部组织分离得到病原菌株中,选取17个作为供试菌株。在PDA培养基上,供试菌株形态表现为菌丝含油球;分生孢子单胞无色、内含油球,大小10.4-15.0μm×4.6-6.4μm;附着胞形态分为卵形、近圆形、裂叶状和不规则形,浅褐色或深褐色,平均大小为10.2μm×7.3μm。用供试菌株ITS序列(Genbank序列号为:HQ845100- HQ845107,HM016792-HM016798,GU597322, HQ828096)进行系统发育分析后,所有供试菌株均与胶孢炭疽Colletotrichum gloeosporioides聚在一类。选用代表性菌株‘w-2’、‘M9’、‘wsg2’进行致病实验,6月份接种果实平均发病100%,叶片平均发病100%,枝干平均发病86%;7月份接种果实发病62%,叶片平均发病100%,枝干平均发病83%。从发病部位均能重新分离得到接种病原。据此,核桃炭疽病病原为胶孢炭疽菌C. gloeosporioides。3.核桃褐色顶端坏死病和黑斑病(Brown apical necrosis & Walnut blight):核桃褐色顶端坏死病和核桃黑斑病症状不同,褐色顶端坏死病发病于花后雌蕊基部、果实顶端,黑斑病发病较褐色顶端坏死病为迟,主要危害果实青皮、叶片、枝梢。但两种病害是复合侵染性病害,病部组织都能分离得到链格孢(Alternaria spp.)、成团泛菌(Pantoea agglomerans)和核桃黄单胞杆菌(Xanthomonas arboricola p v. juglandis)。从分离的真菌病原物中,选取真菌菌株34个作为供试菌株。在PCA培养基上供试菌株的菌落特征分为三组,分生孢子形态表现为2组,产孢表型为2种。根据形态特征将其中33个鉴定为链格孢菌A.alternata,1个鉴定为细极链格孢菌A.tenuissima。对供试菌株ITS(GenBank登录号:JF835805-JF835834,JF835903-JF835906)、OPA2-1(JF835834- JF835868)和OPA1-3(JF835869- JF835899)各区段的DNA序列进行系统发育分析,这些序列对链格孢有区分性,但用这些序列不能对链格孢小孢子种在种的水平上进行有效分类,链格孢真菌在遗传上有较大差异。用链格孢(A. alternata)代表型菌株‘6hao’、‘10-39’和细极链格孢(A. tenuissima)代表型菌株‘10-19’分田间刺伤接种,均有致病性,从发病部位均能重新分离得到接种病原。成团泛菌落圆形,光滑,蜡黄色,菌体呈聚集生长,菌体直杆状,菌体大小为0.9-3.0μm×0.6-1.2μm,周生4-6根鞭毛;菌株‘HXJ’的ITS序列HM016799与已知成团泛菌(Pantoea agglomerans) ITS序列HQ242740、GU477762、GQ494018的同源性均高达99%,故将该类菌鉴定为成团泛菌。接种实验证明成团泛菌主要引起核桃果实内生型顶端坏死,并引起枝叶感病,且参与黑斑病致病过程。核桃黄单胞杆菌菌落圆形,光滑,黄绿色,菌体短杆状,菌体大小为0.3-1.8μm×0.3-0.8μm,端生一根鞭毛;菌株‘lxj1’和‘lxj2’的ITS序列JF835909和JF835910均与核桃黄单孢杆菌(Xanthomonas arboricola pv. juglandis)菌株‘NCPPB 411’的ITS序列(AB558555)有99%的同源性,故将其鉴定为:Xanthomonas arboricola pv. juglandis。接种实验证明核桃黄黄单孢杆菌主要引起果实、叶片和枝梢黑斑病,也诱发幼果顶端坏死。4.核桃溃疡病(Walnut canker):从溃疡病病部组织分离的菌株中,选取4个作为供试菌株。供试菌株在PDA培养基上培养特征表现一致,显微观察其分生孢子梭形,基部钝圆或稍尖,透明,光滑,含有油滴状内含物,孢子大小范围23.2-27.5μm×4.1-8.2μm。菌株‘3hao’的ITS序列JF835907与已知的葡萄座腔球菌(Botryosphaeria dothidea)ITS序列GU226852、HQ392697的同源性高达99%,将其鉴定为葡萄座腔球菌B. dothidea。田间观察和接种实验表明,葡萄座腔球菌能引起核桃主干及主侧枝基部的溃疡,感染小枝出现枯梢症状,发病严重时致树体死亡。5.核桃枯梢病(Walnut shoot dieback):从该病病部组织可分离得到葡萄座腔球菌(B. dothidea )和拟茎点霉(Phomopsis sp.)。拟茎点霉在PDA培养基上可产生成熟的甲、乙型分生孢子。甲型分生孢子纺锤形或椭圆形,无色单胞,含油球;乙型分生孢子细长如线,一端弯曲有时呈钩状,无色单胞。菌株‘Z3-19Y5’的ITS序列(JF835912)与已知的已知的桃溃疡病病原Phomopsis amygdali(AF103001)、蓝莓果腐病原Phomopsis vaccinii(EU520050)的同源性均高达99%。但菌株‘Z3-19Y5’的形态特征与Phomopsis amygdali有较大差异,与P. vaccinii在分生孢子器、甲型分生孢子形态上有明显不同。将供试菌株鉴定为(Phomopsis sp.)。菌株‘Z3-19Y5’接种诱发枯梢的致病率为75%,说明该菌既可单独致病,也可和葡萄座腔球复合侵染引起枯梢。有关拟茎点霉Phomopsis spp.的分类地位尚需进一步研究。