逆转录病毒载体介导的HSV-TK基因在人肾癌GRC-1细胞中的表达及意义的初步研究

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肾癌是泌尿系统常见肿瘤之一,是仅次于膀胱癌在泌尿系统居第二位的恶性肿瘤,随着人均寿命的延长和检查技术的提高,临床发现的病例呈增多之势。肾癌细胞对化疗及放疗的效果均不理想,对生物治疗的探索成为新的热点之一。 自杀基因(suicide gene)疗法,又称药物敏感基因(drug sensitivity gene)疗法,是生物治疗的主要方法之一,也是目前国外研究较多的方法之一;其中,HSV—TK基因是应用最为广泛、进展最快、且很有前途、最具前景的、典型的自杀基因。 本实验利用质粒G1Na及LNTK具有相同的BamHⅠ和HindⅢ位点成功构建带HSV1—TK基因的逆转录病毒真核表达载体G1Na-TK;采用脂质体介导的DNA转染法,成功将TK基因导入GRC—1肾癌细胞中,并筛选出GRC—1/TK细胞;用DNA和RNA打点杂交及PCR检查均观察到TK基因已转入GRC—1细胞并获得表达;GRC—1/TK细胞获得对ACV的敏感性,当ACV浓度为100ug/ml时即可杀死全部的GRC—1/TK细胞;当含有25%的GRC—1/TK细胞即可产生明显的旁观者效应;FCM检测细胞
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