目的：　　何首乌化学成分复杂，只有进入体内（吸收入血或到达靶器官）的药源性成分才可能是其发挥药效的物质基础。何首乌具有保肝护肝、降血脂的药理作用，但不合理用药同时也会产生肝毒性。肝脏是其作发挥疗效或产生潜在肝损伤的主要靶器官。因此，本论文拟针对肝脏中药源性成分建立高灵敏、快速的液质联用定性分析方法，明确肝脏中的药源性成分，进一步丰富对何首乌中效应成分的认识。在此基础上，进一步对何首乌中主要效应成分进行整合药代动力学研究，初步明确何首乌效应成分的动态变化规律，为何首乌的合理用药提供科学依据。　　方法：　　1、建立超高压液相色谱-飞行时间质谱联用（UPLC-Q-TOF-MS）定性分析方法。运用安捷伦定性分析软件（Masshunter Qualitative Analysis）、代谢产物分析软件（Metabolite ID）并结合参考文献以及对照品信息对何首乌提取物、给药提取物（54g/kg）后 SD 大鼠的肝脏和血浆中药源性成分进行检测及鉴定。液相条件：色谱柱采用安捷伦Poroshell 120 EC-C18（3.0 mm×150 mm，2.7μm）。流动相为水（0.1%甲酸）-乙腈（0.1%甲酸），进行梯度洗脱。流速为0.8 mL/min，分流比为1∶3。柱温为40℃。进样体积为2 μL。检测波长：254 nm，320 nm。质谱条件：离子源为大气压电喷雾离子源（ESI）。在负离子检测模式下，采用自动二级质谱扫描（Auto-MS/MS）进行数据采集。一级扫描范围m/z 100~1400，二级扫描范围m/z 50~1000。碰撞能量为10、20、40V。　　2、依据体内药源性成分的研究结果，针对其中具有药理活性的大黄素、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、反式二苯乙烯苷3个成分建立高效液相色谱-三重四极杆质谱联用（HPLC-QQQ-MS）定量分析方法，并进行方法学验证。液相条件：色谱柱采用安捷伦Poroshell 120 EC-C18（3.0×50mm,2.7μm）。流动相为水-乙腈，进行梯度洗脱。流速为0.6 mL/min。柱温为40℃。进样体积为4 μL。质谱条件：采用ESI源。负离子检测模式下，经不断优化裂解电压（Fragmentor）和碰撞能量（collision energy，CE）确定3个效应成分及内标化合物的定量、定性离子对，分别为大黄素m/z 269.0→182.0， 269.0→197.0、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷 m/z 431.1→269.1，431.1→225.1、反式二苯乙烯苷m/z 405.2→243.1，405.2→225.3、内标化合物（1,8-二羟基蒽醌）m/z 239.0→210.8， 239.0→166.9。采用多反应监测模式（Multiple Reaction Monitor，MRM）进行数据采集。　　运用安捷伦定性分析软件、定量分析软件（Quantitative Analysis）以及DAS 2.0软件对所获得数据进行分析，得到3个效应成分的药代动力学参数。基于各个成分的药时曲线下面积（AUC0→∞）在综合药时曲线下面积中所占权重，对所得药代动力学参数进行整合，获得整合药代动力学参数，进而对何首乌体内动态变化过程进行分析。　　结果：　　1、建立了快速分析体内外成分的UPLC-Q-TOF-MS定性分析方法。在12 min内实现了对何首乌乙醇提取物、肝脏、血浆中药源性成分的分析鉴定。从何首乌提取物中鉴定出30个化合物，其中蒽醌类成分11个、二苯乙烯苷类成分7个、黄酮类成分5个和其他类成分7个，并对其质谱裂解规律进行了分析总结。　　首次从靶器官肝脏中鉴定了 11 个药源性成分，其中原型成分 5 个，代谢产物 6个。何首乌在肝脏中Ⅰ相代谢主要发生羟基化转化，Ⅱ相代谢主要发生甲基化、羟化甲基化、氧化乙酰化和葡萄糖苷醛酸化等转化。从血浆中鉴定出27个药源性成分，其中原型成分8个，代谢产物19个，主要为蒽醌类、二苯乙烯苷类、其他类成分及其代谢产物。　　2、建立了HPLC-QQQ-MS定量分析方法。经标准曲线、线性范围、定量限（LOQ）、检测限（LOD）、精密度、专属性、稳定性、基质效应、绝对回收率的方法学验证所建立的方法灵敏度高、选择性强，满足3个主要效应成分大黄素、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、反式二苯乙烯苷的生物样品定量分析需求。经定量分析及DAS软件计算，获得了3个效应成分的药代动力学参数分别为大黄素：Cmax=23.06 ng/mL，Tmax=1.00 h， AUC0→∞=464.53 ng h/mL，T1/2z=12.70 h，MRT0→∞=18.82 h，CLz/F=43.26 kg L/h；大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷：Cmax=7.48 ng/mL，Tmax=1.00 h，AUC0→∞=25.35 ng h/mL， T1/2z=9.51 h，MRT0→∞=8.35 h，CLz/F=839.09 kg L/h；反式二苯乙烯苷：Cmax=4.96 ng/mL，Tmax=0.75 h，AUC0→∞=33.07 ng h/mL，T1/2z=10.56 h，MRT0→∞=13.51 h，CLz/F=656.94 kg L/h。依据整合药代动力学研究理论，通过计算获得整合药代动力学参数分别为Cmax=18.99 ng/mL，Tmax=1.00 h，AUC0→∞=372.20 ng h/mL，T1/2z=12.66 h，MRT0→∞=18.88 h，CLz/F=21.86 kg L/h。　　结论：　　1、在何首乌乙醇提取物分析的基础上，首次报道了靶器官肝脏中11个药源性成分，其中检测到的大黄素、反式二苯乙烯苷、决明柯酮-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-8-O-(6-O-乙酰基)-β-D-葡萄糖苷5个原成分及其6个代谢产物，其可能与何首乌发挥降血脂、保肝护肝、致肝损伤作用相关。通过何首乌提取物、血浆、肝脏中成分之间的对比分析，初步探讨了何首乌中化学成分选择吸收入血后，经血液循环系统运输到靶器官肝脏而发挥作用的传递和转化过程。经肝脏和血浆中药源性成分的对比分析，发现甲基化转化可能为肝脏代谢的一种特殊方式。此外，本论文还首次报道了大黄素甲基化、羟化甲基化、氧化乙酰化、羧化葡萄糖醛酸化、葡萄糖醛酸化氧化和决明柯酮葡萄糖醛酸化代谢产物。通过何首乌体内药源性成分的分析，初步阐明了其发挥作用的效应成分。　　2、针对何首乌中大黄素、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、反式二苯乙烯苷 3 个主要效应成分建立了HPLC-QQQ-MS液质联用定量分析方法，并成功的应用于其整合药代动力学检测。SD大鼠单次口服何首乌乙醇提取物（8.1 g/kg）后，血浆中3个效应成分的综合吸收速率较快，与大黄素吸收过程类似，存在双峰现象。可能与肝肠循环和肠道菌群作用相关。从3个活性成分的AUC0→∞比值1400∶70∶1000和药材中含量比值1∶8∶1000，发现大黄素吸收效率较高，大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷次之、反式二苯乙烯苷吸收效率相对较低。可能为自身理化性质不同所致。此外，单体化合物和综合组分的T1/2、MRT和CLz/F可说明何首乌中主要效应成分在体内存留时间较长、消除相对较缓慢，可能与何首乌的潜在肝损伤相关。