【摘 要】
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Thermochromatium(Tch.)tepidum为嗜硫的紫色光合细菌。光反应中心是由光反应中心RC(Reaction Center)和捕光色素蛋白复合体(light-harvesting)组成。紫外光谱扫描在915 nm处
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Thermochromatium(Tch.)tepidum为嗜硫的紫色光合细菌。光反应中心是由光反应中心RC(Reaction Center)和捕光色素蛋白复合体(light-harvesting)组成。紫外光谱扫描在915 nm处有吸收峰,是由于LHI蛋白结构的特殊性。本课题主要是光反应中心LHI蛋白突变体的异源表达研究。Rhodospirillum(R.)rubrum是紫色非硫光合细菌。随着含氧量的减少,会合成一种带有光合装置的胞内膜(ICM),这种装置是由捕光蛋白以及光反应中心组成。本课题利用分子生物学以及光谱分析技术,体外克隆了Thermochromatium(Tch.)tepidum pufBA序列,并利用PCR特定位点突变四种氨基酸(丙氨酸突变、亮氨酸突变、色氨酸突变以及天冬氨酸突变),将突变后的pufB_iA_i序列构建于pPUTerm重组表达载体上,通过结合转化的方法把表达质粒导入变异株Rhodospirillum(R.)rubrumH2,并对突变体接合子的最佳诱导条件进行优化,分析表达蛋白的特性。结果表明:突变的Thermochromatium(Tch.)tepidum pufB_iA_i在R.rubrumH2中能够被诱导正常的表达,并且其表达量稳定。紫外光谱扫描结果表明,光合细菌菌液均在890 nm附近有特征吸收峰,产生吸收峰的蓝移现象。Thermochromatium(Tch.)tepidum LHI pufB_iA_i蛋白的异源表达,为深入研究Thermochromatium(Tch.)tepidum LHI晶体结构提供理论基础。对光合细菌Thermochromatium(Tch.)tepidum捕光色素蛋白异源膜蛋白的表达研究,这将有助于开发一种新型的膜蛋白表达测试系统,为研究捕光色素蛋白的晶体结构奠定基础。
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