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减蛋综合征(Egg Drop Syndrome, EDS-76),又名鸭腺病毒Ⅰ型(DAV Ⅰ)。该病是由减蛋综合征病毒(EDSV)引起的一种以产蛋鸡产畸形蛋、薄壳或无壳蛋,产蛋率严重下降为主要特征的传染病。1976年首先在荷兰发生,以后在西欧国家相继发生报道,乃至在世界范围内许多国家都有发生,给养禽业带来了巨大的经济损失。五邻体蛋白(Penton)是减蛋综合征病毒主要的结构蛋白之一,五邻体蛋白具有良好的免疫原性和抗原性,并且含有中和抗原表位,其与细胞表面的整联蛋白作用,有助于腺病毒对宿主细胞的吸附结合、侵入和内化。本研究将携带五邻体基因的重组质粒pET-30a-Penton作为PCR扩增模板,利用基因片段重叠表达技术对EDSV五邻体蛋白的抗原表位进行筛选,为EDSV主要抗原结构的深入研究、亚单位疫苗及诊断试剂的研制提供物质基础。本研究为了鉴定EDSV五邻体蛋白的优势抗原表位,制备了鸭抗EDSV阳性血清和鹅抗EDSV血清,可用作血清学诊断试剂,并设计了6个覆盖五邻体结构蛋白的多肽片段,短肽长为84-97aa,相互重叠14-24aa,进行融合表达,利用Ni-NTA对蛋白进行纯化,经Western blot分析表明PA(1-87aa)能够被鸭抗EDSV阳性血清所识别。根据以上试验结果,进一步设计了4个覆盖PA(1-87aa)的多肽片段,这些短肽长为29-33aa,相互重叠12-13aa,进行了第二轮的抗原表位筛选,结果显示PA-1(1-33aa)、PA-2(21-49aa)、PA-3(37-68aa)具有抗原性,将3个抗原优势区合并为一段进行了第三轮筛选,结果显示PA-H-1(1-17aa)、PA-H-4(22-39aa)、PA-H-5(30-47aa)、PA-H-6(38-53aa)、PA-H-8(51-68aa)具有抗原性,其中PA-H-1和PA-H-8抗原性最强,取这两个抗原性最强的短肽进行了第四轮筛选,设计了6个覆盖PA-H-1和PA-H-8的短肽片段,各合成一对寡聚核酸片段,进行融合表达及纯化,经Western blot分析表明PA-H-1.1(1-10aa)、PA-H-1.2(4-13aa)、PA-H-8.1(51-61aa)具有良好的抗原性。最后,为了精确定位EDSV五邻体蛋白的抗原表位进行了第五轮和第六轮的筛选,对Western blot结果加以分析,最终确定EDSV五邻体蛋白的抗原表位区位于N端的M1ESFVPPPR9、V5PPPRVF11和H53SDYFT58处。其中最靠近N段的两个抗原表位有部分氨基酸重合。