【摘 要】
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研究背景:间质性肺疾病（Interstitial lung disease,ILD）是一组以肺部病理改变为主要特征的肺部疾病,疾病终末期可发生呼吸衰竭,治疗手段有限,且治疗效果及预后较差。特发性肺纤维化（Idiopathic pulmonary fibrosis,IPF）是间质肺疾病中最常见的一类,患者中位生存期不到5年。纤维化的发生与反复的肺泡损伤密切相关,并且成纤维细胞的异常活化及增殖是纤维化
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研究背景:间质性肺疾病（Interstitial lung disease,ILD）是一组以肺部病理改变为主要特征的肺部疾病,疾病终末期可发生呼吸衰竭,治疗手段有限,且治疗效果及预后较差。特发性肺纤维化（Idiopathic pulmonary fibrosis,IPF）是间质肺疾病中最常见的一类,患者中位生存期不到5年。纤维化的发生与反复的肺泡损伤密切相关,并且成纤维细胞的异常活化及增殖是纤维化进展过程中的关键部分。细胞骨架运动蛋白肌球蛋白IXB（MYO9B）是肌动蛋白相关分子的重链蛋白,其包含的Rho GAP结构域可调节细胞形态、迁移及细胞增殖。并且,MYO9B可调节Rho相关的卷曲螺旋形激酶（ROCK）的活性,研究已证实ROCK参与肌纤维母细胞的分化。因此,MYO9B活性的改变可能导致纤维化的进展。目的:探讨IPF患者肺组织以及博莱霉素诱导肺纤维化的小鼠模型中MYO9B的表达情况,初步探讨MYO9B在肺纤维化中可能发挥的作用及机制。方法:人体肺组织检测:首先取IPF患者及正常肺组织,通过Western Blot和免疫荧光染色检测MYO9B的表达情况。博莱霉素诱导肺纤维化的小鼠模型检测:实验组采用气道内滴入博莱霉素（BLM）的方法诱导小鼠肺纤维化,对照组气道内滴注生理盐水（Saline）;运用免疫荧光染色检测MYO9B在小鼠肺组织中的表达。将WT小鼠与MYO9B-/-小鼠分别分为实验组及对照组,纤维化组:WT+BLM,MYO9B-/-+BLM;正常对照组:WT+Saline,MYO9B-/-+Saline。造模21天后对各组小鼠肺组织进行标本处理,通过HE、Sirius Red和Masson染色以及Ashcroft评分对肺损伤与纤维化程度进行评估。通过Western Blot检测各组小鼠肺组织中MYO9B、collagen I、fibronectin和α-SMA的表达量,q PCR检测各组小鼠肺组织中collagen I m RNA、fibronectin m RNA和α-SMA m RNA的表达。细胞实验中,取WT与MYO9B-/-小鼠的原代成纤维细胞,用TGF-β分别刺激48小时,检测刺激前后MYO9B、fibronectin和α-SMA的表达水平。Western Blot分别检测BLM诱导的野生型小鼠和MYO9B-/-小鼠肺组织中TGF-β/Smad信号通路的表达。结果:MYO9B在IPF患者的肺组织中表现为高表达水平,免疫荧光染色结果显示MYO9B在小鼠成纤维细胞中高表达。与对照组相比,MYO9B在肺纤维化小鼠模型中的表达升高,病理学分析结果显示经BLM诱导MYO9B-/-小鼠和WT小鼠肺纤维化后,MYO9B-/-小鼠的纤维化程度轻于WT小鼠;MYO9B-/-小鼠肺组织中collagen I,fibronectin和α-SMA的表达水平低于WT小鼠。提取WT小鼠和MYO9B-/-小鼠的原代成纤维细胞,经TGF-β刺激后,MYO9B-/-小鼠的成纤维细胞中fibronectin和α-SMA的表达水平低于WT小鼠。BLM诱导的MYO9B-/-小鼠中TGF-β/Smad信号通路表达低于BLM诱导后WT小鼠。对照组均未表现出统计学差异。结论:敲除MYO9B后可抑制成纤维细胞分化,从而减轻BLM诱导的小鼠肺纤维化,参与肺纤维化的发病机制。
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