滇池、抚仙湖和星云湖同属于滇中高原湖泊,都具有丰富的酵母菌资源,因其海拔高、紫外线辐射强、气压低、氧气含量低等特点而成为特殊高原水环境,使其酵母菌能够进行相应的新陈代谢与分泌胞外酶,以适应这一特殊环境。胞外酶具有独特的生理特性,被广泛用于环境保护、高浓度有机废水处理、食品加工业、医药工业、洗涤剂工业及基因工程等众多领域,有巨大的市场潜力。近年来,对滇池、抚仙湖和星云湖的研究主要集中在湖泊污染及治理方面,但尚未见有关滇池、抚仙湖和星云湖酵母产胞外酶活性的系统研究报道,也未见产酶活性酵母菌与其非生物因子的相关性报道。为此,开展了其可培养酵母菌多样性研究,并对所获得的酵母菌进行胞外酶定性和定量的研究,进而评价产酶活性酵母菌多样性与环境因子之间的相关性,同时探讨酵母菌在湖泊有机质的分解和物质循环中的生态作用,从而为云南高原湖泊酵母菌的深入与系统研究、保护、开发和利用奠定基础,以及为制定和开展高原湖泊的保护及周边环境污染的治理提供一定的理论依据。采用经典纯培养分离与纯化、分类与鉴定的方法,结合DNA区域序列的分析开展滇池沉积物可培养酵母菌多样性的研究,并采用平板筛选法对滇池、抚仙湖和星云湖三个湖泊中的1255株酵母菌在5°C和25°C进行11种胞外酶活性菌株的筛选。结果表明:三个高原湖泊中都栖息着丰富的产胞外酶活性酵母菌,表现出丰富的酵母菌多样性,且产酶菌株数较多,亦即滇池共430株(14个属21个种)、抚仙湖共506株(25个属52个种)和星云湖共319株(17个属38个种),且滇池沉积物产酶酵母菌主要以子囊菌酵母为主,而抚仙湖湖水和星云湖湖水的产酶酵母菌主要以担子菌酵母为主,其中红酵母属(Rhodotorula)是三个湖泊共有的产酶优势属,Rhodotorula mucilaginosa是三个湖泊共有的产酶优势种;所有测试菌株至少都能产一种胞外酶,且三个湖泊酵母菌主要产植酸酶、菊粉酶和淀粉酶,滇池沉积物和星云湖湖水的所有菌株都不产漆酶,抚仙湖仅有32株菌株具有漆酶活性。系统地测定了三个湖泊样品的非生物因子(沉积物:水分、有机碳、总氮、总磷、铵态氮、硝态氮、亚硝态氮;湖水:pH、总磷、总氮、有机碳、总硬度、浊度、电导率),并采用经典分析法对三个湖泊不同样点、不同区域的非生物因子的空间分布特征进行了分析与探讨。研究结果表明三个湖泊各样点的非生物因子在空间分布上存在一定的差异,整体来看,滇池草海的非生物因子的浓度高于外海,抚仙湖和星云湖的非生物因子呈现出南低北高的趋势。采用SPSS软件对滇池、抚仙湖和星云湖酵母菌主要产酶酵母多样性、产11种胞外酶活性菌株比例与各湖泊的非生物因子进行相关性的研究。研究结果表明:滇池、抚仙湖和星云湖主要产酶酵母多样性与各湖泊的非生物因子呈现一定的相关性,但大部分都不呈显著相关性;各湖泊产不同胞外酶的活性菌株比例与菌株所在湖泊的非生物因子也存在一定的相关性,而部分胞外酶的活性菌株比例与总氮、总磷和有机碳等非生物因子具有显著相关性,这可能是因为某些酵母菌能很好的利用硝酸盐、磷酸盐作为氮源进行生长,而有些则不能。从三个湖泊的胞外酶初筛结果中挑选活性较好的278株酵母菌,进行胞外脂肪酶(70株)、淀粉酶(55株)、锰依赖过氧化物酶(72株)、木质素过氧化物酶(72株)和漆酶(9株)酶活力的测定。酶活分析结果表明:抚仙湖酵母菌株产脂肪酶、淀粉酶、木质素过氧化物酶和锰依赖过氧化物酶的产量均高于滇池和星云湖酵母菌株的酶产量,滇池湖泊酵母菌的各种酶产量在三个湖泊中最低;从中筛选到了2株高产脂肪酶的酵母菌株,分别为分离自星云湖的Papiliotrema flavescens Ym26764(25°C)和抚仙湖的Rhodotorula glutinis Ym27053(15°C)。以产脂肪酶发酵培养基为基础,通过单因素实验和正交实验优化方法对Pa.flavescens Ym26764和Rh.glutinis Ym27053菌株进行产酶发酵培养基(碳源、氮源、初始pH)和发酵条件(时间、温度、接种量)的优化。研究结果表明,Pa.flavescens Ym26764菌株的最佳产酶条件为:蔗糖7.5 g/L、尿素25.0 g/L、初始pH 8.0、接种量4%、培养温度25oC、培养时间48 h,脂肪酶活力可达451.09 U/mL,比优化前提高了6.0倍。Rh.glutinis Ym27053菌株的最佳产酶条件为:蔗糖2.5 g/L、氮源为尿素25.0 g/L、初始pH 9.0、接种量4%,培养温度15oC,培养时间96 h,脂肪酶活力可达244.11 U/mL,比优化前提高了3.3倍。