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目的研究锌转运蛋白ZIP14在原发性肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)组织的表达情况;外源锌刺激以及ZIP14过表达对HCC细胞生物学行为的影响。方法1.应用real-time PCR法检测81例HCC患者癌组织与配对癌旁组织、7种人HCC细胞株和1种人肝细胞株的zip14 mRNA的表达情况。应用免疫组织化学法检测60例HCC癌组织与配对癌旁组织的ZIP14蛋白表达。2.应用电感耦合等离子体发射光谱法(ICP-OES法)检测HCC患者、肝硬化患者、慢性肝炎患者和健康体检者的血清锌浓度。3.应用硫酸锌作为外源刺激物,以人HCC细胞株BEL-7404作为研究对象,分别利用TSQ锌离子探针、MTT法、transwell小室法、DNA倍体法和AO/EB染色法研究锌离子浓度变化对BEL-7404的细胞内锌离子相对含量、细胞增殖活性、迁移和侵袭能力、细胞周期和凋亡的影响。4.应用real-time PCR法检测不同锌离子浓度对BEL-7404细胞ZIP14、白蛋白、Bax和Bcl-2 mRNA表达的影响。5.构建稳定表达ZIP14的慢病毒载体,感染低表达ZIP14的HCC细胞株BEL-7404,构建过表达ZIP14的HCC细胞模型BEL7404-ZIP14;研究ZIP14过表达对HCC细胞增殖活性、迁移能力、侵袭能力和细胞周期的影响。结果1.HCC癌组织zip14的mRNA表达水平和蛋白表达中高表达阳性率明显低于相邻的癌旁组织;zip14 mRNA在HCC细胞株BEL-7404呈低表达。2.HCC组和肝硬化组血清锌浓度明显低于慢性肝炎组患者组与正常对照组(P<0.05,P<0.01);HCC组与肝硬化组血清锌浓度相比较差异无显著性(P﹥0.05)。3.随着培养环境中锌浓度的升高,BEL-7404细胞内的锌离子含量增加,BEL-7404细胞的增殖、迁移和侵袭能力降低,细胞被阻滞在G2/M期,凋亡细胞增多;100μM的硫酸锌能使BEL-7404细胞alb mRNA表达量增加(P<0.05),而zip14 mRNA表达量并不会随刺激细胞硫酸锌浓度的改变而发生变化。4.成功建立稳定过表达ZIP14的HCC细胞模型BEL7404-ZIP14。转染后细胞增殖活性、迁移和侵袭能力与转染空载体组相比较明显下降,G2/M期细胞比例升高(P<0.05);其白蛋白mRNA表达水平亦随刺激细胞锌浓度的升高而升高。该现象在培养液锌离子浓度增加的情况下表现更为明显;同时,BEL7404-ZIP14的bcl-2 mRNA表达水平明显低于转染空载体组,而bax mRNA表达水平明显高于转染空载体组(P<0.01)。结论1.ZIP14在HCC癌组织存在低表达;HCC患者的血清锌相较慢性肝炎与健康人群明显降低。2.高浓度的锌离子可以增加BEL-7404细胞内的锌含量,抑制细胞的生长和转移,使细胞周期阻滞在G2/M期,诱导细胞凋亡,增加细胞白蛋白mRNA的表达。3.ZIP14的过表达能促进HCC细胞将锌离子转运至细胞内,增加细胞alb mRNA的表达,抑制细胞的生长和转移,使细胞更多地阻滞在G2/M期,阻止细胞进入下一个细胞周期循环,并可能诱导细胞凋亡。这些现象都在培养环境有锌离子存在时表现的更为显著。