杜仲叶中绿原酸提取纯化绿色工艺的研究

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杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)属于杜仲科杜仲属植物,为我国特有传统名贵木本药用植物,具有强筋骨、补肝肾、降血压、安胎等功效。杜仲叶中绿原酸含量丰富,是提取绿原酸重要的工业原料之一。绿原酸具有抗氧化、抗肿瘤、抗菌等多种活性,其在保健品、化妆品、药品、食品工业都有重要应用。因此建立一种从丰富的杜仲叶资源中提取纯化绿原酸的工艺具有重要意义。本文对杜仲叶中绿原酸提取纯化工艺进行了研究,建立了一种利于工业化生产的绿色工艺方法,并对杜仲叶中的京尼平苷酸与绿原酸两种活性成分的累积含量进行了分析。在研究了料液比、提取时间、提取次数、提取温度等单因素对水提杜仲叶中绿原酸得率影响的基础上,通过正交试验确定了最佳提取工艺条件,即以水为提取溶剂,料液比:1:12,提取时间:40min,提取温度:80°C,提取3次,绿原酸得率为0.82%。通过对7种型号大孔吸附树脂的筛选,选出了NKAⅡ型树脂为最佳树脂,进一步考察了吸附样液浓度、上样流速对该树脂吸附性能的影响,以及不同浓度乙醇对该树脂解吸性能的影响,确立了该树脂分离纯化绿原酸的最佳工艺条件为:在流速为2mL/min条件下,以6倍树脂体积的1.0mg/mL吸附样液上树脂层析柱进行吸附,再用9倍体积的50%乙醇解吸液进行解吸,吸附率及解吸率分别为:93.7%和95.1%。再依次利用萃取、硅胶柱层析以及重结晶对粗品进一步纯化,最终能得到纯度为95%以上的绿原酸。采用反相高效液相色谱法同时测定不同月份杜仲叶中京尼平苷酸和绿原酸的累积含量。在色谱柱:SymmetryShield RP18(250mm×6mm,5μm),流动相:甲醇-水-冰醋酸(体积比29:70:1),检测波长:238nm,流速:1.0mL/min,柱温:30°C的条件下,京尼平苷酸在0.412~2.472μg (r=0.9996)、绿原酸在1.416~8.496μg (r=0.9995)线性关系良好,回收率分别为98.58%和99.08%,RSD分别为1.52%和0.96%。所采用的方法准确、快速、重现性好。通过对5~11月份杜仲叶中京尼平苷酸与绿原酸含量的测定,并对其进行积累动态分析,确定了同时提取杜仲叶中该两种成分的最佳采收期为7月。
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