复方扶芳藤合剂对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响及其机理的探讨

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目的:通过观察复方扶芳藤合剂含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞增殖过程中Notch信号通路的调控作用,阐明复方扶芳藤合剂促进BMSCs增殖的作用机理,试述复方中药抗衰老的科学内涵。  方法:(1)采用体外细胞培养技术,建立稳定的大鼠骨髓间充质干细胞培养体系,通过细胞形态观察不同阶段细胞生长特征;(2)MTT法绘制细胞生长曲线;流式细胞仪检测细胞周期、表面标志;向成骨方向行诱导分化;对BMSCs进行鉴定;(3)将30只雄性SD大鼠随机分为二组,每组15只,分别为复方扶芳藤合剂灌胃的药物干预组和生理盐水灌胃的阴性对照组;取灌胃后10%药物血清及阴性对照组的血清分别对骨髓间充质干细胞进行干预,采用MTT法检测复方扶芳藤合剂对体外培养的大鼠BMSCs增殖的影响;(4)通过RT-PCR检测Notch1、Jagged1、hes1的mRNA表达水平在干预前后的表达变化;(5)通过免疫细胞化学方法检测Notch1、Jagged1的蛋白在干预前后的表达变化。  结果:(1)显微镜下观察全骨髓贴壁法分离纯化培养的 BMSCs以梭形为主,呈放射状排列的细胞集落,细胞生长旺盛;(2)细胞生长曲线呈S形,细胞生长周期为7d。流式细胞仪检测细胞周期示 BMSCs处于G0/G1期的细胞为82.7%,BMSCs均一地表达细胞表面分子抗原CD44、CD90,阳性率分别为,99.4%、99.7%,而CD45呈阴性,阳性率为0.21%。碱性磷酸酶(ALP)染色、茜素红染色呈阳性。检测显示其符合正常间充质干细胞生长特征且生长活跃;(3)MTT结果显示与生理盐水阴性对照组相比,复方扶芳藤合剂含药血清可明显促进 BMSCs增殖(P<0.05);(4)RT-PCR结果显示药物干预组Notch1、Jagged1、hes1的mRNA表达水平均高于阴性对照组(P<0.05);(5)免疫细胞化学结果显示药物干预组Notch1、Jagged1蛋白表达均高于阴性对照组(P<0.05)。  结论:(1)复方扶芳藤合剂含药血清可促进BMSCs的增殖;(2)在复方扶芳藤合剂含药血清促进 BMSCs增值过程中,复方扶芳藤合剂含药血清可以使Notch1、Jagged1、hes1的mRNA和蛋白表达上调;(3)复方扶芳藤合剂通过激活Notch信号通路对BMSCs促进增殖,复方扶芳藤合剂对Notch信号通路的影响可能是抗衰老机制之一。
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