CD147糖基化水平检测的基因编码FRET荧光传感器的设计、表达及应用

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CD147为广泛表达于人体各组织细胞的跨膜糖蛋白,通过与多种不同的配体结合,参与了各种生理、病理过程,如细胞运动、组织重建、炎症发生等。CD147在肿瘤细胞中呈异常高表达,且能够诱导邻近成纤维细胞及肿瘤细胞自身产生胞外基质金属酶(MMPs),以降解胞外基质,促进肿瘤新生血管的形成及癌细胞的浸润转移,因此,CD147又被称为胞外基质金属酶诱导因子(EMMPRIN)。CD147这一功能的发挥与其糖基化状态密切相关,根据其糖链复杂程度及结构不同,可以分为高糖基化(HG-CD147)和低糖基化(LG-CD147)两种形式,功能研究表明,只有HG-CD147才能诱导MMPs的分泌,发挥促肿瘤转移的功能。然而,目前针对CD147的检测大都由其抗体发展而来,且仅能检测CD147分子存在与否,而针对其糖基化修饰水平的检测仍是一片空白。因此,在细胞及组织水平上,开展针对CD147功能实现的活性形式的检测技术研究,对相关疾病及肿瘤转移机制的深入研究具有重要意义。  本工作研究并设计了靶向CD147糖基化修饰水平的基因编码FRET荧光传感器,并对其工作效率进行了检测。首先,我们采用与CD147特异结合的蛋白质或多肽,作为传感器中靶向CD147的识别结构,在此基础上设计并合成了一系列针对CD147糖基化水平的荧光传感器,并通过活细胞共定位实验筛选得到靶向能力最好的一组传感器;然后,我们通过荧光成像在活细胞水平上探究了该组传感器对CD147糖基化修饰水平变化的响应,建立了荧光传感器响应与CD147糖基化水平变化的半定量关系;最后,我们又对荧光传感器的CD147靶向特异性进行了验证。未来将在此系列荧光传感器基础上,进一步完善其响应效率,并有望利用荧光传感器深入研究CD147糖基化与肿瘤转移的关系机制。
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