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马铃薯(Solarium tuberosum L.)属营养繁殖的作物,在营养繁殖过程中易引起退化,目前发现病毒病已成为马铃薯种质退化、产量降低的重要因素。生产上常采用一次茎尖培养和热处理结合一次茎尖培养的方法获得脱毒试管苗,繁殖微型薯,解决种薯的退化问题,但成苗率和脱毒率都较低。
本研究以马铃薯的茎尖为外植体,通过正交设计、随机组合等方法,研究其培养的最佳培养基配方,初步建立了一套快繁技术体系,并采用热处理和二次茎尖培养相结合的方法脱除病毒,主要结果如下:
1.在马铃薯茎尖分生组织培养中,外植体冲洗后,用75%的酒精消毒5s,无菌水清洗3~4次,再用0.1%升汞的溶液消毒3min,无菌水清洗3~4次,可达到理想的消毒效果,同时成苗率可达56.52%。取带2个叶原基的茎尖为外植体,接种到通过正交试验筛选出的适合本试验中不同马铃薯品种茎尖分生组织培养的培养基上,培养基为MS+6-BA0.5mg/L+IAA1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L,成苗率最高可达到59.26%。在培养基中添加适宜浓度的6-BA2.0mg/L 和GA<,3>1.0mg/L,可以促进马铃薯脱毒试管苗的快繁。另外,热处理结合二次茎尖培养脱毒方法的成苗率高达60.00%,脱毒率也高于其它处理,平均脱毒率达到81.25%。
2.以增殖培养基为基本培养基,添加胡萝卜汁,或不加琼脂以滤纸桥作为支持物对马铃薯脱毒试管苗进行快繁,结果表明,这些方法对脱毒试管苗增殖壮苗有显著效果。同时,省略有机成分对马铃薯脱毒试管苗的生长没有太大影响,而且能够节省成本。在所试验的几种生长延缓剂中,增殖培养基中附加500mg/L的CCC(矮壮素)保存效果最为理想,可使马铃薯试管苗种质保存12个月以上。光温条件对润者品种试管薯的形成和产量研究结果表明,在25℃下光照8h/d的条件利于大试管薯的形成。试管模拟大庆地区苏打盐碱土对11个马铃薯品种进行了适应性鉴定,结果表明,荷兰5号在抗盐碱性上明显好于其它10个品种。
3.采用3种不同体积配比的基质进行移栽试验,比较马铃薯脱毒试管苗的移栽成活率、单株结薯数、单块茎重等各项生理指标,结果表明:蛭石和草炭土按1:1组成的基质最适宜微型薯生长,单株结薯数最多,达到8.45粒。但由于其价格昂贵,所以使用与其产量差异不显著的砂和草炭土按1:1组成的基质来代替。