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目的：建立超高效液相色谱-三重四极杆在线离子阱串联质谱法（UPLC-Qtrap）及超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法（UPLC-MS/MS）用于血浆中黄体酮浓度的测定，研究黄体酮乳膏剂与胶囊剂在体内的药物动力学和相对生物利用度。
方法：1.取Beagle犬血浆样品，加入适量内标（炔诺酮），用液相萃取技术，经超高效液相色谱分离，色谱柱：Agilent ZORBAX-SB C18分析柱（150mm×2.1mm，5μm），保护柱：Agilent C18分析柱（10mm×2.1mm，5μm），流动相：甲醇-0.1%甲酸水溶液（90：10，V/V），流速0.2mL·min-1，采用UPLC-QtrapAPCI离子化-串联质谱多离子反应监测（MRM）模式进行检测，放电电流（NC）=3.00；雾化气（GS1）=0.00；UPLC-Qtrap辅助气（GS2）=50.00；气帘气（CUR）=30.00；温度（TEM）=350.00，碰撞活化裂解（CAD）为Medium（以上单位均为仪器单位），离子选择通道分别为m/z 315.30/109.00（黄体酮）和m/z 299.30/109.10（内标）。2. 取Beagle犬血浆样品，加入适量内标（炔诺酮），用液相萃取技术，经超高效液相色谱分离，色谱柱：Waters SymmetryShieldTM RpC18分析柱（150mm×4.6mm，5μm），保护柱：Agilent C18分析柱（10mm×2.1mm，5μm），流动相：甲醇-0.1%甲酸水溶液（90：10，V/V），流速0.5mL·min-1，采用LC-MS/MS APCI离子化-串联质谱多离子反应监测（MRM）模式进行检测，放电电流（NC）=3.00；雾化气（GS1）=35.00；气帘气（CUR）=15.00；温度（TEM）=350.00，碰撞活化裂解（CAD）=5.0（以上单位均为仪器单位），离子选择通道分别为m/z 315.30/109.00（黄体酮）和m/z 299.30/109.10（内标）。3. 采用LC-MS/MS法测定beagle犬血浆中黄体酮药物浓度。用DAS程序计算药物动力学参数。
结果：1.UPLC-Qtrap测定黄体酮血浆浓度在0.5～25ng·mL-1范围内线性关系良好（r=0.9991），日内和日间精密度试验的RSD均小于7.5%，方法回收率为91.80%～100.66%，提取回收率为84.24%～91.53%，最低检测限为0.2ng·mL-1；2. UPLC-MS/MS测定黄体酮血浆浓度在0.4～20ng·mL-1范围内线性关系良好（r=0.9881），日内和日间精密度试验的RSD均小于7.5%，方法回收率为94.38%～99.67%，提取回收率为81.24%～92.38%，最低检测限为0.2ng·mL-1；3. 黄体酮乳膏剂在体内具有良好的吸收。
结论：建立的LC-MS/MS方法用于血浆中微量药物的浓度检测，具有专属性强，灵敏度高，准确性好的特点。