噬菌体展示技术体内筛选小鼠肾脏特异性多肽

来源 :东南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shy19780928
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:本课题旨在利用噬菌体随机多肽文库对小鼠进行体内筛选,获得小鼠肾脏血管特异性多肽。 方法:1、小鼠的体内筛选实验动物为6-8周的SPF级雌性Balb/c鼠,乙醚麻醉小鼠后尾静脉注射C7C噬菌体多肽文库200μl,循环10分钟后,将小鼠再次麻醉,打开胸腔,心脏灌注预热的TBS约50ml。分离肾脏,洗涤后称重、研磨。研磨液经三次洗涤后一部分进行噬菌体滴度测定,余下的铺IPTG/X-gal平板,刮取平板上至少200个蓝色噬菌斑,感染处于对数中期的大肠杆菌ER2738,并在ER2738内进行扩增,扩增后的噬菌体同样进行滴度测定,计算下一轮循环所需要的噬菌体量。重复以上操作进行三轮循环。 2、多肽测序第三轮循环后,测定未扩增噬菌体洗液滴度,随机扩增滴度测定板上24个蓝色单克隆,分别提取其DNA。用试剂盒内的-96gIII引物在全自动测序仪上进行测序列,并分析这些多肽的共有序列。 3、免疫组化染色将出现次数最多的多肽噬菌体注入Balb/c鼠体内,循环10分钟后心脏灌注,收获其肾脏,制成新鲜的冰冻切片,先后与抗M13单克隆抗体和辣根过氧化物酶连接的兔抗小鼠单克隆抗体进行孵育,最后加底物DAB显色,以小鼠脑,心脏,肺,肝作为对照。 结果:经过三轮筛选,特异性结合于小鼠肾脏血管的噬菌体得到富集,测序结果显示多肽序列VSASYHR出现的概率最大(62.5%),其次为GQWGARG(25%)。免疫组化染色显示以上两种多肽噬菌体均富集于小鼠肾脏,与肾脏血管内皮特异性结合。 结论:利用噬菌体七肽文库C7C对小鼠进行体内筛选,可以得到小鼠肾脏血管特异性多肽,为肾脏的靶向诊断和治疗提供新的思路。
其他文献
背景:天然抗体(natural antibody)已成为近年来学术界的研究热点。天然抗体是机体对抗原免疫应答的产物,并非“天然”产生,主要存在于ABO,MNSs,P和Lewis血型系统中。天然抗-A
戒指,盟约之证,爱情之信物。关于戒指的起源有多种说法,其中一种认为,戒指源自古代的太阳崇拜。古代戒指以玉石制成环状,象征太阳神日轮,认为它像太阳神一样,给人以温暖,庇护
背景:主动脉夹层(Aortic dissection,AD)是一种潜在致命性的心血管疾病,需要非常及时的诊断和手术治疗来挽救病人的生命,目前对于夹层的患者,除了ACEI类及降压药物,仍未证实有任何
目的:本研究采用不同的二维超声心动图分析方法对肾移植术后患者心脏功能进行对比分析,找出各种分析方法的优缺点,选出影响因素小,易于掌握和运用的心功能测定方法、指标及肾
介绍了日本在农村地区实施FTTH的最新技术方案,包括网络结构、光纤光缆、跨中接入、现场施工等,为我国FTTH的发展提供参考。 This paper introduces the latest technologic
目的:研究三萜类化合物羽扇豆醇对肝癌细胞的生长抑制作用和凋亡诱导效应,并探讨羽扇豆醇抗肝癌效应的作用机制。 方法:1.用RT-PCR和Western Blot法检测DR3在肝癌细胞HepG2
基于15肽与卵巢癌组织的靶向性结合和抑制作用,以及纳米金本身的光动力作用、穿透性能、表面易修饰等特点,本文利用聚吡咯修饰合成纳米金花,结合15P(SHSWHWLPNLRHYAS)靶向分子,研
期刊
研究目的: 使用超声心动图中速度向量成像技术评价阿霉素致兔早期心肌损害,并与心肌病理改变对照,探讨无创性检测化疗药物至心肌损害方法的应用价值。 资料与方法: 41只
活跃在当今画坛的山西画家裴玉林,以他的花鸟画著称于艺苑。他那充满生活气息的《红了高梁》《硕果图》《咏秋》以及水墨淋漓的墨牡丹和紫葡萄早为人们所熟悉。山西素来是人