【摘 要】
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目的IL-10是具有多重效应的细胞因子,作用于抗原递呈细胞或者CD4+T细胞在抗感染免疫中起免疫调节作用,直接作用于CD8+T细胞在抗肿瘤免疫中则起免疫活化作用。迄今对IL-10+CD8+T细胞中的了解有限。我们使用IL-10e GFP报告基因小鼠,通过体外培养的方式诱导CD8+T细胞产生IL-10,然后分选出IL-10e GFP阳性和IL-10e GFP阴性的CD8+T细胞,对这两组细胞进行RN
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目的IL-10是具有多重效应的细胞因子,作用于抗原递呈细胞或者CD4+T细胞在抗感染免疫中起免疫调节作用,直接作用于CD8+T细胞在抗肿瘤免疫中则起免疫活化作用。迄今对IL-10+CD8+T细胞中的了解有限。我们使用IL-10e GFP报告基因小鼠,通过体外培养的方式诱导CD8+T细胞产生IL-10,然后分选出IL-10e GFP阳性和IL-10e GFP阴性的CD8+T细胞,对这两组细胞进行RNA测序。通过对测序结果进行分析,探寻IL-10+CD8+T细胞的分子和细胞特性;通过流式细胞仪及其它手段方法对这些特性和表型进行进一步的验证。IL-10+CD8+T细胞的转录组特征可能部分是由于IL-10通过自分泌作用于CD8+T细胞产生的。为了进一步了解IL-10作用于CD8+T细胞产生的转录组改变与IL-10+CD8+T细胞本身的转录组有什么区别,我们还对IL-10处理和未处理的CD8+T细胞进行转录组分析。通过分析这些数据,有利于探明IL-10+CD8+T的特性,为利用这群细胞治疗肿瘤提供理论依据。方法1.淋巴细胞的获取与培养:CO2处死小鼠,无菌条件下摘取淋巴结,研磨后过滤获得单个淋巴细胞,计数后培养。2.磁珠法负向分选细胞:对获取的单个淋巴细胞使用含有特定抗体的磁珠进行孵育,然后使用磁铁吸附磁珠,上清中含有分离后的细胞。3.流式细胞术分选细胞:对获得的淋巴细胞进行表面染色,然后使用流式细胞仪对目的细胞群进行分选。4.RNAseq:使用磁珠负向分选CD8+T细胞或者使用流式细胞仪对活化的T细胞进行分选,然后对分选的CD8+T细胞使用第三代测序技术进行转录组测序。5.流式细胞术检测表型:对T细胞进行表面及胞内染色,然后使用流式细胞仪对这些细胞进行表型分析。结果1.通过分析IL-10-CD8+T细胞与IL-10+CD8+T细胞的转录组数据,了解了IL-10+CD8+T细胞的转录组特征。2.发现CXCR6和Tim-3高表达于IL-10+CD8+T细胞表面。3.通过比较接受IL-10信号刺激和不接受IL-10信号刺激的CD8+T细胞的转录组,了解了IL-10对CD8+T细胞的转录调控。结论相比于IL-10-CD8+T细胞,IL-10+CD8+T细胞是一群高表达CXCR6和Tim-3,有更强杀伤潜力的T细胞。
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