前期研究认为结缔组织可能是经络的物质基础,其中的肥大细胞与经络感传现象有密切联系。荧光染色发现活性氧的分布与经络的走向高度重合。所以本文从活性氧影响结缔组织肥大细胞的功能入手,旨在探讨活性氧、肥大细胞与经络之间的相互关系。实验分为体外细胞实验与组织切片染色实验两部分,具体如下:(1)组织切片染色实验:选取腹壁肌层正中间的腹白线部分、小肠及肠系膜等结缔组织进行形态学特征等研究;利用HE、甲苯胺蓝等染色法来研究动物体结缔组织中肥大细胞的分布情况。(2)体外细胞实验:利用体外细胞培养方法,初步探索活性氧对肥大细胞功能特性的影响;通过肥大细胞与成纤维细胞的共培养及三维培养,探究这两种细胞之间及两者与胞外基质之间的相互作用。实验结果如下:(1)组织切片染色:通过对腹白线、小肠及肠系膜甲苯胺蓝染色,发现三者均含有较多肥大细胞,在血管周围大部分肥大细胞呈线性排布。通过大鼠尾静脉注射过量过氧化氢,大鼠体内肠系膜肥大细胞出现严重脱颗粒现象;而通过大鼠体内尾静脉注射过量谷胱甘肽,将引起肥大细胞明显的衰亡。(2)体外细胞实验:实验结果表明低浓度的过氧化氢促进肥大细胞增殖,而高浓度的过氧化氢抑制肥大细胞增殖,且浓度越高抑制作用越显著;百草枯能够抑制肥大细胞增殖。过氧化氢(浓度为50μM-800μM)对于肥大细胞脱颗粒无明显影响;高浓度的百草枯能够明显促进肥大细胞组胺释放,加入SOD后发现肥大细胞组胺释放明显减少。通过肥大细胞与成纤维细胞共培养后发现,在过氧化氢刺激下成纤维细胞能够明显促进肥大细胞脱颗粒,而在百草枯作用下成纤维细胞能够抑制肥大细胞脱颗粒。通过肥大细胞与成纤维细胞的三维培养发现,肥大细胞能够促进成纤维细胞增殖、拉伸及“触角”增多,并且能够降低活性氧对成纤维细胞的伤害。实验结论:本文初步证实了在腹白线、小肠及肠系膜等富含活性氧的结缔组织中含有较多肥大细胞;体内合适浓度的活性氧对肥大细胞维持正常脱颗粒功能至关重要。活性氧影响肥大细胞的增殖活性、细胞形态、脱颗粒功能及肥大细胞与成纤维细胞间的网络功能,从而在经络系统的结缔组织中起到可能的信号传导作用。这些结果将有助于经络系统作用机制的深入研究。