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普鲁兰(Pullulan),又称短梗霉多糖,是真菌茁芽短梗霉(Aureobasidium Pullulans)产生的一种胞外多糖,具有独特的物理、化学及生物学性质,目前已广泛应用于环保、食品、农业、医药等领域,市场前景极为广阔。开展普鲁兰高产菌株的选育是实现其工业化生产,推动生物絮凝剂产业发展的前提。本研究应用基因组改组技术对茁芽短梗霉进行选育,筛选普鲁兰高产菌株。首先研究了原生质体制备的最优条件,发现以培养至16h并在含0.1%甘氨酸的培养基中预处理30min的茁芽短梗霉作为制备原生质体的材料,经浓度为2mg/ml的蜗牛酶、纤维素酶、溶菌酶在30℃的条件下处理90min,并用KCl溶液进行原生质体重悬,原生质体生成率最高。然后应用紫外灭活和热灭活的方法对原生质体进行灭活标记,紫外灭活和50℃热灭活的最佳时间均为25min,灭活率分别达到了99.98%和100%。接着对原生质体最优融合条件进行研究,结果表明:在浓度为25%、融合时间为7min、融合温度为30℃、分子量为6000且有二甲亚砜、Ca2+等辅助试剂存在的条件下,原生质体的融合率相对较高,达到0.71‰。最后,对融合后的重组子进行筛选。经过三轮基因组改组后筛选得到2株产量较高的高产突变株A312、A38,其中A312在发酵培养基中发酵70 h后,普鲁兰产量为20.3 g/L,比原始菌株DES7及C75提高了2倍多。且传代3次后A312、A38普鲁兰产量与传代前相比变化率仅分别为0.79%和0.5%,说明A312、A38菌株遗传特性较稳定。