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猪细小病毒（Porcine parvovirus，PPV）属于细小病毒科、细小病毒属，基因组由单股线性负链DNA构成，大小约为5000nt，PPV的基因组编码三种非结构蛋白（NS1、NS2和NS3）和三种结构蛋白（VP1、VP2和VP3）。其中VP2占据了病毒衣壳的绝大部分，并能够自我装配成类病毒颗粒。转铁蛋白受体（transferrin receptor，TfR）是位于细胞膜上的跨膜蛋白，介导含铁的转铁蛋白从细胞外转运到细胞内。TfR存在于许多细胞的表面，代谢越旺盛的细胞其表达量越高。病毒与细胞表面受体的结合是病毒感染复制过程中的始动环节，也是影响病毒宿主特异性、组织亲嗜性和致病性的决定性因素之一。研究证实，犬细小病毒和猫泛白细胞减少症病毒是通过VP2结合细胞表面的转铁蛋白受体进而感染细胞的。PPV与CPV、FPV的同源性较高，尽管衣壳蛋白氨基酸序列不完全相同，但在VP2起始的甘氨酸富集区却出现四个高度同源的区域，VP2氨基酸序列同源性达到50~60％。由这种同源性可推测PPV VP2能够与猪TfR结合，从而促进PPV感染。为了验证该假设，本实验进行了前期的准备，包括蛋白表达、抗体的制备、酵母双杂交检测及猪转铁蛋白受体逆转录病毒包装质粒的构建等工作。本研究主要将猪TfR和PPV VP2基因进行截短表达，首先通过在线软件分析，找出猪转铁蛋白受体的胞外区，将其分成四段，构建原核表达质粒，进行表达并纯化蛋白，将纯化的蛋白免疫小鼠，制备大量多克隆抗体，目的是为封闭细胞试验奠定基础。同样，将猪细小病毒的VP2基因分成五段，构建原核表达质粒，进行表达并纯化蛋白，将纯化的蛋白免疫小鼠，制备大量多克隆抗体，目的是为封闭病毒试验奠定基础。酵母双杂交技术是一种研究蛋白与蛋白相互作用的较为简便、灵敏和高效的方法。本研究通过酵母双杂交技术检测截短的猪转铁蛋白受体与VP2之间是否存在相互作用。将截短的四段猪TfR连接到诱饵载体上，构建诱饵质粒；将截短的五段VP2连接到捕获载体上，构建捕获质粒；分别将诱饵质粒和捕获质粒转化酵母菌株Y2H和Y187。通过携带诱饵质粒的Y2H和携带捕获质粒的Y187之间的双杂交检测截短的猪转铁蛋白受体与VP2之间是否具有相互作用，结果未发现它们之间具有相互作用。逆转录病毒载体是由某种逆转录病毒序列构建的基因运载工具，能够携带外源基因进入宿主细胞，并整合到染色体基因组上。在受体重建方面，通过融合PCR和增加扩增循环数的方法，扩增猪TfR的全长基因，将其连接到逆转录病毒载体pLXRN上，为构建稳定表达猪TfR的细胞系奠定了基础。以上研究，都是本实验的基础性工作，这些工作的建立和完成，为今后进一步研究猪转铁蛋白受体与PPV-VP2之间的相互作用奠定了一定的物质基础。