【摘 要】
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目的:一款矿化的脱细胞肌腱支架制备及其表征分析。方法:1.脱细胞肌腱的获取:从家猪前蹄肌腱中制作得到样品切片:获得的样品通过脱水,包埋,切片后行HE染色、DAPI染色:用苏木精和伊红(h&e)染色以评估脱细胞的效果。对脱细胞肌腱进行DAPI染色,HE染色。脱细胞肌腱的矿化模型制备:矿化液的试调制备成功后,将脱细胞肌腱的中间部分在低温时浸没在矿化液,切片后,对肌腱纵切面及表面行Micro-CT、透射
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目的:一款矿化的脱细胞肌腱支架制备及其表征分析。方法:1.脱细胞肌腱的获取:从家猪前蹄肌腱中制作得到样品切片:获得的样品通过脱水,包埋,切片后行HE染色、DAPI染色:用苏木精和伊红(h&e)染色以评估脱细胞的效果。对脱细胞肌腱进行DAPI染色,HE染色。脱细胞肌腱的矿化模型制备:矿化液的试调制备成功后,将脱细胞肌腱的中间部分在低温时浸没在矿化液,切片后,对肌腱纵切面及表面行Micro-CT、透射电镜验证肌腱表面矿化。将脱完细胞的肌腱0.2g/ml与培养基(DMEM)共置放,吸出的培养基做为浸提液,使用DMEM梯度稀释浸提液培养的MSCs细胞,通过cck-8、live/dead染色检测脱细胞肌腱的细胞毒性与组织相容性。结果:1、H&E染色、提示成功制备了脱细胞的人工肌腱,苏木精和伊红(H&E)染色提示肌腱的脱细胞效果良好。脱细胞后,肌腱似乎比天然结构松散,但保留了肌腱的主要结构。脱细胞后的骨和纤维组织与天然结构相比没有差异。2、DAPI染色提示人工肌腱的纤维组织结构完整,仅丧失了具有免疫源性的细胞。3、矿化的人工肌腱在micro CT、投射电镜下,通过图像软件分析,可计算在不同矿化液配方下的浸泡4周之后的矿化面积比,其中又以0.5%乙酸+100m M柠檬酸矿化后4周后的矿化面积最高。4、在同一脱细胞肌腱在经过矿化后,在不同位置可以看到,具有丰富矿物质沉淀在肌纤维之间的部分、少量矿物质沉淀、无矿物质沉淀的肌纤维,证明在经过我方研究改良的矿化液浸泡四周之后,是能够做到,在同一脱细胞肌腱上,呈现出矿物质沉积于肌纤维的状态。5、制备成功的矿化人工脱细胞肌腱使用cck-8法测量其评估矿化的脱细胞肌腱的细胞毒性,对照组(用DMEM培养的MSCs)(HESC-MSC,购于原生生物)和实验组分别(用25%、50%、75%和100%DMEM提取液培养的MSCs)细胞代谢活性无显著性差异(p>0.05)。live/dead图也可见,在实验组及对照组的脱细胞肌腱上,MSCs能够生长。具有良好的生物相容性。结论:通过实验,成功制备出不具有免疫源性的、具有矿化带的脱细胞人工肌腱,或许能够成为未来组织工程实现软组织-骨界面的再生的关键步骤。
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