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第一部分:FBXL19-AS1在骨肉瘤组织和细胞中表达情况目的:1、验证在骨肉瘤组织与细胞中的长链非编码RNA(LncRNA)FBXL19-AS1的表达量。方法:使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测FBXL19-AS1在骨肉瘤组织与肿瘤旁组织表达水平对比和骨肉瘤细胞(MG63、U2OS、SAOS2、HOS、143B)与人成骨细胞(h FOB1.19)表达水平对比。结果:1、相对于肿瘤旁组织,LncRNA FBXL19-AS1在骨肉瘤组织中表达上调。2,相对于人成骨细胞LncRNA FBXL19-AS1在骨肉瘤细胞株中表达上调。结论:提示FBXL19-AS1在骨肉瘤中可能具有相关生物学意义。第二部分:FBXL19-AS1对骨肉瘤细胞增殖的影响目的:寻找FBXL19-AS1在对骨肉瘤细胞MG63、143B增殖的影响。方法:慢病毒感染下调MG63、143B的FBXL19-AS1,CCK-8检测FBXL19-AS1对骨肉瘤细胞MG63、143B增殖抑制影响,流式细胞术测FBXL19-AS1对骨肉瘤细胞MG63、143B细胞周期的影响,Western blot测FBXL19-AS1对骨肉瘤细胞MG63、143B细胞周期凋亡蛋白影响,裸鼠皮下移植瘤实验检测FBXL19-AS1对骨肉瘤细胞体内增殖影响。结果:1、CCK-8测得下调FBXL19-AS1组较阴性对照组细胞增殖能力下降;2、流式细胞术测下调FBXL19-AS1骨肉瘤细胞MG63、143B细胞周期发生阻滞于G1期;3、Western blot测得下调FBXL19-AS1能抑制cyclin D1、CDK4、CDK6等G1期相关周期蛋白并促进细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子P27;4、裸鼠皮下移植瘤实验下调FBXL19-AS1的骨肉瘤细胞移植瘤较阴性对照减小。结论:FBXL19-AS1促进骨肉瘤增殖,下调FBXL19-AS1后骨肉瘤细胞增殖能力降低。第三部分:FBXL19-AS1对骨肉瘤细胞侵袭转移能力的影响目的:验证FBXL19-AS1在对骨肉瘤细胞MG63、143B侵袭转移的影响。方法:细胞划痕实验评估FBXL19-AS1对骨肉瘤细胞迁移的影响;Transwell实验检测FBXL19-AS1对骨肉瘤细胞侵袭和迁移的影响。结果:1、细胞划痕实验测得下调FBXL19-AS1降低骨肉瘤细胞迁移能力;2、Transwell迁移实验验证下调FBXL19-AS1的骨肉瘤细胞MG63、143B较阴性对照组细胞迁移能力下降;3、Transwell侵袭实验验证下调FBXL19-AS1的骨肉瘤细胞MG63、143B较阴性对照组细胞侵袭能力下降。结论:FBXL19-AS1促进了骨肉瘤的迁移与侵袭,下调FBXL19-AS1后骨肉瘤细胞迁移与侵袭。第四部分:FBXL19-AS1作为ceRNA调控miR-346目的:验证FBXL19-AS1作为ceRNA调控miR-346机制。方法:荧光原位杂交技术(FISH)与胞浆胞核分离实验检测FBXL19-AS1在细胞中的定位;q-PCR实验检测miR-346在骨肉瘤细胞中表达量;荧光报告素酶报告实验验证FBXL19-AS1与miR-346结合方式。结果:1、荧光原位杂交技术与胞浆胞核分离实验检测FBXL19-AS1主要存在细胞质中;2、q-PCR实验检测在miR-346骨肉瘤细胞表达较低并与FBXL19-AS1呈显著负相关;3、荧光报告素酶报告实验验证FBXL19-AS1与miR-346直接结合。结论:FBXL19-AS1作为ceRNA调控miR-346。第五部分:FBXL19-AS1调控miR-346促进骨肉瘤细胞的增殖与侵袭转移目的:验证FBXL19-AS1调控miR-346对骨肉瘤细胞的增殖与侵袭转移的影响。方法:CCK-8实验与平板克隆实验评估FBXL19-AS1调控miR-346对骨肉瘤细胞增殖的影响;细胞划痕实验验证FBXL19-AS1调控miR-346对骨肉瘤细胞迁移能力影响;Transwell实验检测FBXL19-AS1调控miR-346对骨肉瘤细胞侵袭和迁移的影响。结果:1、CCK-8实验验证FBXL19-AS1是通过调控miR-346促进骨肉瘤细胞增殖;2、平板克隆实验验证FBXL19-AS1是通过调控miR-346促进骨肉瘤细胞的集落形成;3、细胞划痕实验FBXL19-AS1是通过调控miR-346促进骨肉瘤细胞的迁移;4、Transwell侵袭实验验证FBXL19-AS1是通过调控miR-346促进骨肉瘤细胞的迁移与侵袭。结论:FBXL19-AS1调控miR-346促进骨肉瘤细胞的增殖与侵袭转移。