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为构建H7N9亚型禽流感病毒反向遗传操作系统,本研究选取H7N9禽流感病毒A/Chicken/Shanghai/S1053/2013(CK/53)为亲本毒株,构建了H7N9亚型禽流感病毒的八质粒反向遗传操作系统,并拯救出H7N9流感病毒救获毒株rCK/53。由于H7N9亚型禽流感病毒出现了186V和226L的突变,为了探究这几个关键位点对病毒受体结合特性的影响,拯救了一系列HA氨基酸位点突变的病毒,发现186V和226L对其具有的α2,6-唾液酸受体结合特性起到重要作用。2013年爆发的新型H7N9禽流感病毒在大部分人体内出现了PB2E627K的突变,为进一步探讨其宿主适应性,对救获病毒在哺乳动物细胞(MDCK)上传代培养,到第六代发现病毒的PB2也出现了E627K的突变,说明其在哺乳动物细胞上复制几代之后会更适应在哺乳动物细胞中的生长。为避免H7N9造成更大范围的蔓延及引发更大的损失,以A/PueaoRico/8/34(PR8)的内部基因为骨架,以CK/53的HA和NA表面基因为供体,构建了H7N9亚型禽流感病毒疫苗候选株PR8-CK53。rCK/53和PR8-CK53在MDCK和A549两种细胞上进行生物学特性的比较,两者生长趋势差异不明显。H7N9亚型禽流感病毒疫苗候选株PR8-CK53为进一步的免疫保护实验奠定了基础。由于禽流感病毒持续的抗原漂移与重组,导致不断产生多种新型重组病毒,因此,挑选最新的、最合适的疫苗供体并通过反向遗传操作技术制备候选疫苗株,是应对禽流感病毒最有效的策略。本研究基于2013年爆发的H5N2新型重组禽流感病毒,通过对3株禽源流感病毒A/Chicken/Shandong/03/2013(SD03),Chicken/Hebei/03/2013(HB03),A/Chicken/Hebei/2012(HB2012)基因的进化分析,发现HA基因与M基因均来源于H5N1,且HA属于clade7.2分支,并与clade7.2分支经典毒株A/Chicken/Shanxi/2/2006(H5N1)的同源性相差较远。NA、PB2及其他基因均来源于H9N2,与最新分离的H5N2同源性高达99.8%,所以研究新的H5N2亚型禽流感疫苗十分重要。本研究以SD03、HB03、HB2012的表面基因为供体,并对表面基因HA其碱性裂解位点进行了分子修饰,使其碱性氨基酸位点突变掉(将-QIEGRRRKRG-突变为-QRETRG-),具备了低致病性流感病毒的特征,随后,以PR8内部基因为骨架,利用反向遗传操作系统成功拯救了三株H5N2候选疫苗株,为进一步免疫保护实验奠定了基础。