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血清补体蛋白C3是宿主先天性免疫防御系统的中心分子,在补体活化的经典途径、替代途径以及甘露聚糖结合凝集途径中均发挥枢纽作用。在哺乳动物免疫系统中,C3d是补体C3分子不能再被蛋白酶裂解的最小片段,能与抗原保持结合。C3d与B细胞和滤泡树突状细胞(FDC)上受体(CR2,CD21)的相互作用,对于正常体液免疫应答的诱导和维持至关重要,研究相继证实3个拷贝的C3d分子是一个能够显著增强体液免疫效力的分子佐剂。由于C3d分子是通过与B细胞表面C3d受体CD21分子的直接结合而发挥生物学作用,因此C3d3作为分子佐剂可能为排除疫苗在人群中的个体差异创造了机遇;并正好符合hCGβ基因避孕疫苗追求体液免疫效应的目标。
本研究所使用含有能够增强目的基因表达效率的狗胰岛素前原信号肽(dogpre-pro-insulinsignalsequence,DPPISS)的真核表达质粒pCMV4-hCGβ-C3d3、pCMV4-hCGβ和pCMV4-C3d3,为本实验室前期构建。以上述真核表达质粒分别对于以体液免疫效应为主的BALB/c小鼠和以细胞免疫效应为主的C57BL/6J小鼠进行基因免疫,观察分子佐剂C3d3在个体差异较大的不同品系小鼠中增强hCGβ基因避孕疫苗pCMV4-hCGβ-C3d3的免疫原性;并探讨分子佐剂C3d3作用的可能机制。
1.真核表达质粒pCMV4-hCGβ-C3d3、pCMV4-hCGβ和pCMV4-C3d3的制备、纯化及体内表达大量抽提质粒pCMV4-hCGβ-C3d3、pCMV4-hCGβ和pCMV4-C3d3,质粒纯度及浓度采用紫外分光光度计测定
2.分子佐剂C3d3增强hCGβ基因疫苗在不同品系小鼠体液免疫效应
3.分子佐剂C3d3选择性促进B细胞克隆扩增
4.分子佐剂C3d3上调Raji细胞表面B7-1,B7-2分子表达