微生物酶法联产D-天冬氨酸和L-丙氨酸

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本论文主要研究了以D,L-天冬氨酸为反应底物,利用德阿昆哈假单胞菌中的L-天冬氨酸-β-脱羧酶作为酶源,专一催化L-天冬氨酸脱除β位羧基生成L-丙氨酸,从而实现D-天冬氨酸和L-丙氨酸联产的工艺过程。通过对定量测定丙氨酸和天冬氨酸含量的纸层析法进行优化,确定最佳条件为:展开剂正丁醇:冰醋酸:水的比例为4:1:1(v/v/v);茚三酮添加量为0.5%(w/v);30℃恒温水浴洗脱20 min;洗脱后检测波长为510 nm。为了提高酶活力对菌体培养条件进行了优化,确定最适培养条件为:菌体培养温度为30℃,培养时间为24 h,液体培养基pH值为6.0,谷氨酸钠添加量为3%,接种量为8%,装液量50 mL/500 mL,摇床转速为180 r/min。酶法联产D-天冬氨酸和L-丙氨酸的最佳工艺条件为:D,L-天冬氨酸溶液的浓度为0.5 mol/L;接菌量为12%(g/ml);辅酶磷酸吡哆醛的添加量为0.15 mmol/L;转化反应温度为37℃;采取静置反应方式。经检测实验所得的D-天冬氨酸纯度为97.4%,L-丙氨酸纯度为95.3%。通过研究有机溶剂(丙酮)和表面活性剂(CTAB、SDS、甜菜碱、吐温-80)对摩尔转化率的影响,转化第2天添加0.1%(w/v)的CTAB,能够有效地提高摩尔转化率使其高达93.3%,较未添加时提高了 11.1%。
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