【摘 要】
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甜瓜是我国农业生产中一种重要的园艺作物,传统的农业生产模式在枯萎病、根结线虫病等土传病害的危害下导致无法连年耕作,已成为限制我国瓜类蔬菜优质高产的重要因素。对瓜类蔬菜进行嫁接可以解决连作障碍,提高产量和果实品质,同时提升植物的抗逆性能力,嫁接技术已经大范围应用于现代化的农业生产当中。本研究将以甜瓜做为瓜类蔬菜代表作物,通过两种不同染色技术,确定甜瓜嫁接苗维管束中木质部和韧皮部连通的具体时间,从而确
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甜瓜是我国农业生产中一种重要的园艺作物,传统的农业生产模式在枯萎病、根结线虫病等土传病害的危害下导致无法连年耕作,已成为限制我国瓜类蔬菜优质高产的重要因素。对瓜类蔬菜进行嫁接可以解决连作障碍,提高产量和果实品质,同时提升植物的抗逆性能力,嫁接技术已经大范围应用于现代化的农业生产当中。本研究将以甜瓜做为瓜类蔬菜代表作物,通过两种不同染色技术,确定甜瓜嫁接苗维管束中木质部和韧皮部连通的具体时间,从而确定接穗砧木愈合的具体时间;通过植物代谢组学手段,了解瓜类蔬菜在嫁接后的愈合过程,研究在愈合过程中涉及的代谢产物,分析受到扰动的代谢通路,为嫁接砧穗高效利用提供一定的理论依据,也为嫁接体接口愈合机制提供新的研究方法。主要研究内容和研究结果如下:(1)分别对嫁接后1-7天接穗和砧木茎段进行徒手切片取样,脱色之后进行碘液染色处理,冲洗干净之后于体式显微镜下拍照观察。实验结果发现,从第2天开始淀粉在接穗开始积累,到第5天接穗积累的淀粉开始往下运输,说明维管束的韧皮部在第四天至第五天之间连通;到第七天接穗茎段不再有淀粉积累,糖类等营养物质不再有上下不对称性,说明甜瓜嫁接苗维管束已经连通。(2)使用荧光染料对嫁接苗染色。对嫁接后3-7天嫁接苗进行洗根处理,将嫁接苗根部浸入5 mg/m L的荧光染料溶液中,利用高光谱成像技术于暗室中在365 nm紫外光下观测染色情况。结果发现,在光谱图中,第四天之前只有砧木中有荧光峰,说明木质部尚未连通;第五天接穗中开始出现强度较低的荧光峰,木质部开始连通;第六天接穗中出现强度较高的荧光峰,说明维管束的木质部在第五天至第六天之间连通,接穗砧木已经愈合。(3)对甜瓜苗代谢组学样品前处理流程中的萃取剂、衍生化工艺进行优化,最终选择甲醇:乙腈(2:1)作为甜瓜嫁接苗的代谢物提取剂,在氮气流保护下干燥,然后置于70℃干燥箱中反应30 min完成肟化反应,加入衍生化试剂后在37℃摇床上反应90 min完成衍生化反应;对仪器参数条件中的升温程序进行优化,最终选用升温程序为:初始温度60℃,保持5 min,之后以5℃/min,升温至300℃,保持5 min。(4)通过气相色谱质谱联用仪分别对甜瓜嫁接苗的接穗和砧木进行了代谢组学研究,分析了甜瓜苗在嫁接后第1天至第7天之间的愈合过程,解释了嫁接后相关生理生化变化的原因。通过对质谱图的分析鉴别,共计在甜瓜嫁接苗中鉴定到83种小分子代谢物,包括11种糖类,7种糖醇,16种氨基酸,18种有机酸及其衍生物,3种胺类化合物,28种未分类物质。在接穗当中,筛选出30个差异代谢物,与不嫁接的甜瓜苗相比,各种差异代谢物含量整体上升;在砧木当中,筛选出29个差异代谢物,与不嫁接的甜瓜苗相比,各种差异代谢物含量整体下降,与第二章中淀粉等糖类物质在接穗砧木中的不对称分布现象相互对应。总体来说,接穗和砧木中物质含量丰度呈现较大的不对称性。分别将接穗和砧木中的差异代谢物行代谢通路富集分析,最终在接穗中筛选到四条受到扰动的代谢通路,包括:淀粉和蔗糖代谢、半乳糖代谢、抗坏血酸和藻酸盐代谢、甘油脂代谢;在砧木中筛选到四条受到扰动的代谢通路,包括:淀粉和蔗糖代谢、半乳糖代谢、抗坏血酸和藻酸盐代谢、不饱和脂肪酸的合成。
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