涎腺腺样囊性癌(SACC)是好发于腮腺、颌下腺及小涎腺的口腔颌面部恶性肿瘤之一,具有嗜神经侵袭以及远处转移两大生物学特性,其临床生物学特性表现为感觉和(或)运动神经功能障碍,易通过血行转移至肺,术后易复发,预后较差。本课题组通过前期大量的实验研究,发现Notch信号通路与肿瘤的发生发展密切相关,通路中的受体基因Notch1能够作为促癌基因促进涎腺腺样囊性癌的增殖、侵袭及迁移。国内外众多研究表明,HES1、HEY1基因是Notch1信号通路的下游基因,二者可能在多种肿瘤的发展演化中发挥着癌基因的作用。本研究在课题组前期研究的基础上,筛选出Notch1信号通路的下游基因HES1、HEY1,研究其与涎腺腺样囊性癌细胞增殖、侵袭、迁移的关系并对可能的机制进行探讨。本研究按照基因的筛选和细胞功能学实验分为两部分,分述如下:一、在SACC细胞中利用Real-time PCR技术筛选出与Notch1变化相关的下游基因,并在组织水平验证其表达。目的:筛选与Notch1表达变化相关的下游靶基因。方法:根据文献选取的常见的Notch1的下游基因设计引物。用Notch1的si RNA转染SACC-83细胞,通过Real-time PCR技术检测Notch1下游基因的表达量;构建Notch1基因重组腺病毒表达载体,感染SACC-83细胞,应用Real-time PCR技术研究其下游基因的表达变化。收集涎腺腺样囊性癌组织和癌旁组织的石蜡标本,利用筛选出的下游基因的相应抗体进行免疫组化,经2名病理科医师阅片评分后统计结果。结果:Real-time PCR检测结果显示Notch1表达下降后,HES1、HEY1的表达也相应降低;而Notch1表达升高后,HES1、HEY1的表达也随之上升。涎腺腺样囊性癌癌组织标本中HES1、HEY1的表达高于癌旁组织。结论:HES1、HEY1的表达变化与Notch1的表达变化呈正相关关系。二、利用si RNA干扰技术探讨HES1、HEY1对SACC细胞功能的影响。目的:研究HES1、HEY1在SACC细胞增殖、侵袭以及迁移中的作用。方法:设计合成HES1、HEY1的si RNA,转染SACC-83细胞,HES1、HEY1的表达量的变化通过Real-time PCR技术进行验证,筛选出两条干扰有效的si RNA,转染SACC-83细胞使其HES1、HEY1的表达显著下调后,采用CCK8法、平板克隆形成实验研究细胞增殖能力的变化;采用细胞划痕愈合法研究细胞迁移能力的变化;采用侵袭小室法研究细胞侵袭能力的变化;采用流式细胞术研究细胞周期和凋亡的变化。结果:Real-time PCR结果显示HES1、HEY1表达下降;CCK8和平板克隆形成实验证实HES1、HEY1转染后,细胞增殖能力弱于阴性对照组;侵袭小室、划痕愈合实验结果表明,HES1、HEY1表达下降后,SACC-83细胞的侵袭、迁移能力也随之下降;流式细胞术的结果发现转染HES1、HEY1后细胞的早期和晚期凋亡率升高,而细胞周期和对照组相比没有差异。结论:抑制HES1、HEY1基因的表达后SACC细胞的增殖、侵袭和迁移能力均下降,而细胞凋亡率升高。