【摘 要】
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猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸困难为主的传染病,对全球养猪业造成重大影响。疫苗免疫是防控该病的重要方法,目前我国批准上市的疫苗中有经典株和高致病性株,其中TJM-F92疫苗株是一种以高致病性TJ株为基础,其Nsp2中出现了自然缺失的120个氨基酸。本研究通过对PRRSV保守的核衣壳蛋白（N蛋白）和TJM-F92株缺失片段TJ120进行原核表
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猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸困难为主的传染病,对全球养猪业造成重大影响。疫苗免疫是防控该病的重要方法,目前我国批准上市的疫苗中有经典株和高致病性株,其中TJM-F92疫苗株是一种以高致病性TJ株为基础,其Nsp2中出现了自然缺失的120个氨基酸。本研究通过对PRRSV保守的核衣壳蛋白（N蛋白）和TJM-F92株缺失片段TJ120进行原核表达与纯化,建立了鉴别PRRSV野毒株与TJM-F92疫苗株抗体的间接ELISA和胶体金试纸条。本研究运用PCR技术扩增出ORF7和TJM-F92株缺失片段TJ120,构建原核表达载体p ET28a（+）-PRRSV-N和p GEX-6P-1-Nsp2-TJ120,并进行蛋白的表达与纯化。将纯化的p ET28a（+）-PRRSV-N蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA和胶体金试纸条。优化后的间接ELISA中p ET28a（+）-PRRSV-N的最佳包被浓度为2μg/m L,阴阳性临界值为0.3172,血清的最佳稀释度为1:320,与IDEXX商品试剂盒相比整体的符合率为88.8%。优化后的p ET28a（+）-PRRSV-N胶体金试纸条中金标SPA最佳稀释度为1:1,兔抗猪Ig G最佳包被浓度为1.0mg/m L,p ET28a（+）-PRRSV-N最佳包被浓度为0.6mg/m L,敏感性为1:160,与IDEXX商品试剂盒相比整体的符合率为81%。将纯化的pGEX-6P-1-Nsp2-TJ120蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件建立了鉴别诊断TJM-F92疫苗抗体的间接ELISA和胶体金试纸条。优化后的间接ELISA中p GEX-6P-1-Nsp2-TJ120的最佳包被浓度为4μg/m L,阴阳性临界值为0.3097,血清的最佳稀释度为1:320,在对未免疫TJM-F92疫苗和灭活苗的血清抗体检测中与IDEXX商品试剂盒相比整体的符合率为85%。优化后的p GEX-6P-1-Nsp2-TJ120胶体金试纸条中金标SPA最佳稀释度为1:1,兔抗猪Ig G最佳包被浓度为1.0mg/m L,p GEX-6P-1-Nsp2-TJ120最佳包被浓度为0.8mg/m L,敏感性为1:80,在对未免疫TJM-F92疫苗和灭活苗的血清抗体检测中与IDEXX商品试剂盒相比整体的符合率为79%,能够鉴别野毒抗体与TJM-F92疫苗抗体。综上所述,本研究建立了鉴别PRRSV野毒抗体与TJM-F92疫苗株抗体的间接ELISA和胶体金免疫层析方法。在对应用TJM-F92疫苗株的猪场进行抗体检测时p ET28a（+）-PRRSV-N用于检测PRRSV抗体的阴阳性,p GEX-6P-1-Nsp2-TJ120用于鉴别上述阳性抗体中的疫苗抗体和野毒抗体。综合分析两个结果可以精准识别免疫效果,为该病的防控提供技术支持。
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