目的：非小细胞肺癌中EGFR基因突变与酪氨酸激酶抑制剂靶向药物的疗效密切相关,我们试图应用先进的生物技术建立一种新方法,能够在有限的肿瘤标本中快速,准确且灵敏地检测EGFR的基因突变。方法：我们研究了一种双退火引物荧光定量PCR法(DPO-qPCR法),来对非小细胞肺癌病人组织或血浆标本的EGFR基因常见突变进行检测。位于19外显子的DelE746-A750微缺失突变和21外显子的L858R点突变与酪氨酸激酶抑制剂类药物的敏感性相关,我们分别针对这两个常见突变设计了DPO引物并对182个临床样本进行检测,最后我们还将DPO-qPCR法,直接测序法和突变富集PCR三种方法的检测结果进行了比较。结果：通过细胞系梯度稀释模板,我们检测出19外显子DelE746-A750微缺失突变和21外显子L858R点突变检测的DPO引物分别能够检测到低至0.78%和0.025%的野生型背景里的突变型模板(经过计算,分别折合为78和2.5拷贝突变等位基因)：我们在182个临床样品中共检测到52例突变,突变率为28.57%。与现有的其他检测方法突变率较一致。其中有4例标本仅在DPO引物中检测为阳性,10例标本仅在ME-PCR中检测为阳性。我们在154个晚期标本中共检测到51例突变,28个早期标本中共检测到1例突变,突变率分别为33.12%和3.57%.结论：该基于荧光定量PCR的改良型双退火引物检测系统DPO-qPCR可以用于临床EGFR基因突变的检测和验证,在对非小细胞肺癌患者的EGFR常见突变临床检测方面具有一定的应用前景。