目的:探究大鼠H9C2心肌细胞在缺氧复氧过程中Beclin-1是否被Caspase-3剪切,以及抑制Beclin-1的剪切对H9c2细胞缺氧复氧后自噬、凋亡和坏死的影响。方法:本研究用大鼠H9c2心肌细胞缺氧复氧作为模型,观察复氧过程中Beclin-1及其剪切体的蛋白表达;将H9c2心肌细胞用Caspase-3抑制剂(Ac-DEVD-CHO)预处理后(Caspase-3 Inhibition,Cp3I),再进行缺氧5小时后复氧2小时(hypoxia 5 hours reoxygenation 2 hours,H5R2)处理。比较Cp3I+H5R2组、H5R2组、Cp3I组和假手术组的Beclin-1及其剪切体的蛋白表达;同时根据氨基酸序列比对,将Beclin-1在147号易被Caspase-3剪切的天冬氨酸突变为谷氨酸,并分别将突变型Beclin-1(M-Beclin-1)和未突变型Beclin-1(W-Beclin-1)转染至H9c2细胞中,再比较缺氧5小时复氧2小时后两组Beclin-1及其剪切体的表达和分布;最后运用流式细胞仪来检测M-Beclin-1组和W-Beclin-1组在缺氧5小时后的复氧过程中,细胞自噬、凋亡和坏死水平的变化。结果:在大鼠H9c2心肌细胞缺氧5小时后复氧的过程中,Western Blot上出现了Beclin-1剪切体的印记;Cp3I+H5R2组中Beclin-1的剪切体数目少于H5R2组(p<0.001);M-Beclin-1组在细胞缺氧5小时复氧2小时后,Beclin-1被剪切现象明显少于W-Beclin-1组(p<0.05);在细胞中分别过表达未突变型和突变型的Beclin-1后,两组细胞随着复氧时间的推移,细胞自噬水平先增加后减少,但突变组的自噬程度高于同时期的未突变组。过表达未突变型的细胞随着复氧时间的推移,凋亡的细胞和坏死的细胞不断增多;过表达突变型的细胞随着复氧时间的推移,细胞的凋亡和坏死均维持在低水平。结论:本实验方法和条件下得出的结论如下:在大鼠H9c2心肌细胞缺氧复氧的过程中,存在着Beclin-1被Caspase-3剪切的现象,且抑制Beclin-1剪切,可以提高复氧后的细胞的自噬水平,降低细胞凋亡和坏死的水平,为临床上治疗缺血性心肌病提供新的思路。