应激是机体在受到应激原刺激时作出的适应性综合反应。当有害的应激原(如严重创伤)作用强烈持久时，机体将出现过度应激，过度应激的最主要表现之一是下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴)异常亢进。 HPA轴的异常亢进可导致机体免疫功能抑制，使感染易于扩散。近期的诸多研究表明，创伤后的免疫抑制可促进感染的发生，从而诱发系统性炎性反应综合症(SIRS)、多器官功能障碍综合症(MODS)等。另外，HPA轴的亢进还可能是创伤应激不良综合症、应激性溃疡等的发病原因。这些都说明，以HPA轴亢进为主要表现之一的过度应激导致机体稳态失恒，因此，调节HPA轴的兴奋性可适时适度地控制机体的应激反应、维持机体的稳态、改善机体免疫功能。设法弄清楚HPA轴过度兴奋的原因，并从此原因着手进行调控，无疑为创伤的救治提供了新的思路， 海马是控制应激时HPA轴兴奋性的主要脑区，因此，海马功能的改变会影响其神经冲动的传导从而影响HPA轴。海马功能的改变又与NMDA受体(NR)密切相关，因此，我们设想，严重创伤可能会导致海马NR活性发生改变，进而引起HPA轴兴奋性的异常改变。 基于以上设想，我们以大鼠背部30％TBSA Ⅲ度烫伤作为严重创伤过度应激模型，采用Cell-attached膜片钳、放射配基结合法、RT-PCR、原位杂交、RIA双抗体法、Western blot、免疫共沉淀+Western blot、海马内微量注射、高效液相色谱及反义核酸技术，研究了：1)严重烫伤后海马NR活性的变化特点，2)严重烫伤后海马NR活性的变化对HPA轴的影响，3)严重烫伤后海马NR活性的变化对HPA轴影响的机制，4)严重烫伤后海马NR活性增强的机制。主要研究结果及结论如下： 一、严重烫伤后海马NR活性变化特点 l．严重烫伤后 0．sh、lh、Zh、4h、sh、24 h、48h海马NR的亲和力显著增加，尤以烫伤后 Zh最为明显。最大结合量从 lh起亦显著增加，说明严重烫伤后海马NR活性显著增强。 2．通过膜片钳技术，直接观察到烫伤后备时相点海马单个NR通道的开放概率增加非常显著，尤以烫伤后Zh最为明显。开放时间常数在部分烫伤组织中亦有不同程度的增加，说明烫伤应激导致了NR通道持续激活。这与放射配基结合法检测的NR亲和力及最大结合量的变化相互印证。 二、严重烫伤后海马NR的变化对HPA轴的影响 l．30OTBSA Ill度烫伤后0．sh，大鼠的血皮质醇浓度即异常升高，烫伤后Zh达高峰，烫伤后二天仍显著高于正常对照组；下丘脑CRH转录水平的基因表达持续上升，烫伤后Zh达高峰。说明严重烫伤导致HPA轴持续过度亢进。本实验中HPA轴兴奋性的变化趋势与大鼠严重烫伤海马NR活性的变化趋势基本一致，初步提示严重烫伤后海马NR激活可能是HPA轴持续兴奋的重要原因。 2．海马内微量注射MK叱 6fig可明显降低烫伤后下丘脑CRHmRNA阳性神经元数及血皮质醇浓度，注射MK七 12吃可进一步降低烫伤后下丘脑CRHmRNA阳性神经元数及血皮质醇浓度，表明HPA轴的兴奋程度依赖于海马NR通道的激活程度，初步证明严重烫伤时海马NR的激活是HPA轴亢进的重要原因。 3．海马内微量注射ANRI 10nmol 可明显降低烫伤后下丘脑CRHmRNA阳性神经元数及血皮质醇浓度；注射ANRI 20nmol可进一步降低烫伤后下丘脑CRHmRNA阳性神经元数及血皮质醇浓度。进一步证明海马NR介导了严重烫伤HPA轴的持续过度激活。 三、严重烫伤后海马NR的变化对HPA轴影响的机制 1．与单纯烫伤大鼠相比，腹腔注射生理盐水未引起烫伤后血皮质醇浓度的显著变化，腹腔注射地塞米松使烫伤后的血皮质醇浓度有所降低，下 Vlll 降幅度为 8刀％，但并无统计学差异（P＞0刀5），这表明烫伤大鼠的负反馈 功能受到了损害。 2．烫伤后，海马 GR mRNA水平即显著下降，GR蛋白也显著下降， 说明背部严重烫伤可导致海马GR减少，且GR的减少是由于基因表达受 到抑制从而使其合成减少引起的。由于GR的改变将使得GC在海马水平 的负反馈受到影响，因此，严重烫伤后海马GR的表达下降是严重烫伤GC 的负反馈受到抑制的重要原因，从而也是HPA轴持续过度兴奋的重要原 因。 3．烫伤前腹腔注射NRtA抗剂MK801 3mg从g可以使烫伤后海马GR mRNA水平显著上升，注射 MK801 6mg几g使 GR mRNA水平进一步上升， 烫伤前使用生理盐水却没有这种作用，表明烫伤应激时GR的基因表达受 到NR的调节，NR引起HPA轴的亢进可能是通过下调海马GR从而影响 了GC在海马水平的负反馈引起的。 4．严重烫伤后海马 CAI区、CA3区以及齿状回都有大量 CRH mRNA 阳性神经元，转录整体水平较对照组显著增强，提示严重烫伤过度应激时 海马可能通过直接合成CRH，参与了严重烫伤后的HPA轴的亢进。烫伤 前腹腔注射NRtA抗剂MKE01 3mg从g可使CM mMA水平显著下降，