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目的: 一、完善甲壳低聚糖-硒的合成方法,提高产品的产量和纯度。 二、研究甲壳低聚糖、甲壳低聚糖-硒对THP-1源性巨噬细胞脂质转运及抗氧化酶相关基因表达的影响。 方法:本研究分以下两部分 一、甲壳低聚糖-硒的合成及检测方法的完善:将甲壳低聚糖与硒络合成甲壳低聚糖-硒,对络合物进行紫外、红外光谱检测,并用紫外分光光度法测定甲壳低聚糖-硒中的硒含量。 二、用100ug/ml的甲壳低聚糖及甲壳低聚糖-硒分别处理THP-1源性巨噬细胞6小时、12小时、24小时、48小时,运用半定量逆转录多聚酶链反应方法检测其LDL受体、CD36、ABCA1、SR-BI及SOD、GSH-Re、NOS的mRNA的变化。 结果: 一、甲壳低聚糖-硒水溶液中不存在游离的硒离子,紫外及红外检测说明硒和甲壳低聚糖形成了稳定的络合物,此络合物中含硒元素683.5μg/g。 二、甲壳低聚糖各处理时间组与各相应对照组比较:LDL受体、CD36的mRNA表达下调具有显著性;ABCA1、SR-BI的mRNA表达上调具有显著性;SOD、GSH-Re的mRNA表达上调具有显著性;NOS在6小时处理组的mRNA表达具有显著性,超过6小时无表达。 三、低聚糖-硒各处理时间组与各相应对照组比较:LDL受体、CD36的mRNA表达下调具有显著性;ABCA1、SR-BI的mRNA表达上调具有显著性;SOD、GSH-Re的mRNA表达上调具有显著性;NOS6小时处理组的mRNA表达上调具有显著性,超过6小时无表达。将甲壳低聚糖-硒与甲壳低聚糖各相应处理时间组比较:LDL受体、CD36、ABCA1、SR-BI的mRNA表达无统计学学意义;而SOD、GSH-Re及NOS的6小时处理组的mRNA表达上调具有显著性。 结论: 一、甲壳低聚糖能与硒形成络合物,配位基团主要是氨基,其次羟基也有一定的配位能力。此络合物没有杂质,甲壳低聚糖的结构没有因硒的络合而受到破坏。 二、甲壳低聚糖和甲壳低聚糖-硒均能上调ABCA1、SR-B1的mRNA表达水平,下调CD36、LDL受体的mRNA表达水平,二者作用水平相当。根据这些基因表达产物的功能分析,证明二者(主要是甲壳低聚糖成分)有促进胆固醇的逆向转运作用。 三、甲壳低聚糖和甲壳低聚糖-硒均能上调NOS、GSH-Re和SOD的mRNA表达水平,而甲壳低聚糖-硒比甲壳低聚糖上调更加明显。由此说明二者均有较强的抗氧化作用,且甲壳低聚糖-硒抗氧化作用更强,在使用剂量范围不出现硒的毒性反应。