Th17细胞在弓形虫感染小鼠中的免疫病理作用研究

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目的:建立弓形虫RH株速殖子感染BALB/c小鼠动物模型,研究弓形虫感染小鼠后体内Th17细胞和相关细胞因子的变化,探讨Th17细胞在弓形虫感染中的免疫病理作用。  方法:77只正常BALB/c小鼠随机分为感染组65只,正常对照组12只。感染组小鼠腹腔内注射弓形虫速殖子(1.0×104/ml,0.5ml/只),对照组以等量生理盐水同法注射。感染后每天观察小鼠发病情况,取发病小鼠腹腔液分离鉴定弓形虫速殖子。另取小鼠肝、脾和肺组织进行常规病理学检查,用免疫荧光法检测各组织中弓形虫抗原,经PCR扩增各组织中弓形虫核酸确定感染模型建立成功。感染后每12小时处死感染组小鼠5只,收集其脾细胞和血清,采用PE-IL-17 McAb、PE-Cy5-CD3 McAb及 FITC-CD4 McAb进行细胞染色后应用流式细胞仪检测 Th17细胞,ELISA法检测小鼠血清中细胞因子IL-17、IL-6以及抗弓形虫特异性IgM抗体的动态变化。另收集正常小鼠的脾细胞和血清同法检测Th17细胞及相关细胞因子。  结果:  1、BALB/c小鼠感染弓形虫速殖子后4-5天开始发病表现为食欲减退、耸毛、闭目、活动减少,部分小鼠出现腹泻,6-7天死亡。小鼠腹腔液经Giemsa染色可见呈新月形或香蕉形弓形虫速殖子。  2、病理检查感染小鼠肝脏损害较明显,表现为肝细胞液化坏死、水变性,炎细胞浸润及肝细胞再生;肺脏出现肺水肿,支气管粘膜及肺间质炎性细胞浸润;脾脏无明显病理损伤。  3、免疫荧光法检测感染小鼠肝、脾和肺组织中弓形虫抗原的分布,各组织内均可见特异性绿色荧光,尤以肝脏分布较明显。  4、用PCR法扩增弓形虫速殖子B1基因部分片段,在感染小鼠外周血、肝脏、脾脏、肺和腹腔液中均扩增得到特异性目的条带。  5、ELISA法检测感染小鼠体内抗弓形虫特异性IgM抗体在12h至96h均在正常水平上下波动,在108h-132h开始上升且高于正常水平,与正常组比较差异均有统计学意义。  6、流式细胞术检测感染小鼠脾脏中CD3+CD4+IL-17+Th17细胞在感染后12h显著增高,与正常对照组比较具有统计学意义,24h至60h有所下降但仍高于正常水平,72h至96h下降至最低水平,与正常小鼠比较差异有统计学意义。  7、ELISA法检测IL-17在小鼠感染后12h至36h升高,与正常对照比较差异有统计学意义,48h至144h于正常水平上下波动;IL-6在12h至48h与正常对照比较含量无明显改变,60h至72h降至最低,84h至132h上升高于正常水平,与对照组比较差异均有统计学意义。  结论:  1、BALB/c小鼠经腹腔接种弓形虫速殖子后可建立弓形虫急性感染小鼠模型。  2、Th17细胞及IL-17在弓形虫急性感染早期发挥免疫病理作用使宿主感染加重,而IL-6则参与感染晚期的免疫病理损伤加速宿主死亡。
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