精液稀释和保存是人工授精技术的关键步骤,在猪精液常温保存过程中,随着保存时间的延长,过量活性氧(ROS)在精液中开始积累,而猪精子的特殊膜结构使其更容易受到自由基的氧化损伤,最终导致精子活率下降、顶体受损甚至受精能力丧失。此外,精液中的细菌和一些病原微生物不仅会直接和精子竞争营养物质,其代谢活动的产物还会损伤精子的正常生理功能,这是精液质量下降、人工授精效果降低的重要原因。本试验通过测定精子活率、质膜完整率、顶体完整率、总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)含量、活性氧(ROS)水平、精子运动性能和精液中细菌含量等指标,探究了D-异抗坏血酸钠和溶菌酶对猪精液常温保存效果的影响,并分析筛选了两种物质在猪精液常温保存基础稀释粉中的最适添加浓度,为猪精液常温保存稀释粉配方的改良提供了参考。以下为本研究主要结果:1.将不同浓度(0、0.002、0.004、0.006、0.008、0.010 mg/mL)的D-异抗坏血酸钠添加到猪精液常温保存基础稀释液中可以不同程度地改善精液保存效果。随着D-异抗坏血酸钠浓度的增加,精液的保存效果呈现先增后减的趋势。当D-异抗坏血酸钠的浓度为0.006 mg/mL时,精液有效保存时间为5d,且精子活率、质膜完整率、顶体完整率和精液总抗氧化能力(T-AOC)显著高于对照组和其他试验组(P<0.05),丙二醛(MDA)含量和活性氧(ROS)水平显著低于其他组。保存第3d时,0.006 mg/mL试验组的精子运动性能参数最好,且显著优于对照组和低浓度组(0.002 mg/mL)。当D-异抗坏血酸钠的浓度为0.008 mg/mL时,精液各项指标虽然显著高于对照组(P<0.05),但相比于0.006mg/mL试验组却有明显的下降趋势,所以,添加0.006 mg/mL D-异抗坏血酸钠时,精液常温保存效果最好。2.在猪精液常温保存基础稀释粉中添加不同浓度(0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mg/mL)的溶菌酶,对于猪精液的常温保存有一定的改善作用。当溶菌酶的浓度为2.0 mg/mL时,保存各天的精子活率、质膜完整率和顶体完整率都显著高于其他各组(P<0.05)。保存的第1 d、第3 d和第5 d,同一天的精液中的细菌含量随着溶菌酶浓度的增加而减少,到第5d时,各组间细菌含量差异显著,当溶菌酶的浓度为2.5 mg/mL时,精液中的细菌含量显著低于其他各组(P<0.05)。保存第3d,当溶菌酶浓度为2.0 mg/mL时,VSL(直线速度)、VAP(路径速度)和ALH(侧摆幅度)3项运动性能参数显著高于对照组(P<0.05),CMS(曲线运动)和BCF(鞭打频率)则显著低于对照组(P<0.05),其他各试验组间无显著性差异。综合对比结果表明,2.0 mg/mL为溶菌酶在猪精液常温保存稀释粉中的最适添加浓度。3.在交叉混合试验中,将0.006 mg/mL的D-异抗坏血酸钠和1.5 mg/mL的溶菌酶联合添加到猪精液常温保存基础稀释粉中能够显著提升保存后猪精子的活率和质膜完整率,且效果显著好于对照组和两种物质单独使用的试验组(P<0.05)。综上,D-异抗坏血酸钠和溶菌酶对于猪精液常温保存的效果有一定的提高作用,能够有效保护精子性能,提升精液保存质量,其最适添加浓度分别为0.006 mg/mL和2.0mg/mL,联合添加的最适浓度组合为0.006 mg/mL的D-异抗坏血酸钠和1.5 mg/mL的溶菌酶。