rhG-CSF对供者外周血Th1/17和IL-17+Foxp3+Treg细胞的影响及其调控机制的初步研究

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目的:异基因造血干细胞移植作为治疗血液系统良、恶性疾病有效方法,在临床推广使用,而粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)是重要的干细胞动员剂,也是免疫调节剂。本课题目的在于研究造血干细胞移植供者 rhG-CSF动员后,外周血 Th1/17和 IL-17+Foxp3+Treg新细胞群体及 Th17相关细胞因子变化,以及动员前后供者外周血 CD4+T细胞中细胞因子信号负调控因子3(SOCS3)及干扰素调节因子8(IRF8)表达情况。  方法:广州市第一人民医院2013.1~2015.1行造血干细胞移植供者15名,rhG-CSF5μg/kg/d,皮下注射,在动员第0天、第5天,采集空腹外周血,分离动员前后外周血中单个核细胞,采用流式细胞技术检测供者动员前后CD4+IL-17+INF-γ+(Th1/17)细胞和IL-17+Foxp3+Treg细胞百分数:采用ELISA方法检测供者动员前后血清中Th17相关细胞因子IL-17A、IL-27浓度变化;免疫磁珠法分离上述单个核细胞中的CD4+T细胞,采用RT-PCR法检测供者动员前后CD4+T细胞中SOCS3和IRF8基因表达;采用western blotting技术检测CD4+T细胞中SOCS3和IRF8蛋白表达变化。  结果:供者外周血中,Th1/17细胞由动员前的(5.832±2.404)%下降到动员后(4.097±1.840)%,且差异有统计学意义(P<0.05)。IL-17+Foxp3+Treg细胞百分比在动员前为(4.021±1.676)%,动员后下降为(2.7567±1.341)%,差异有统计学意义(P<0.01)。ELISA检测细胞因子IL-17A由动员前(21.75±18.77)pg/ml降为动员后(18.53±17.89)pg/ml;而IL-27在动员前是(5180.06±1860.75)pg/ml,动员后是(4806.56±1658.89)pg/ml,两者差异均有统计学意义(P<0.01)。RT-PCR检测SOCS3在动员后相对动员前表达量增加2.0684倍,而IRF8基因表达在动员后基因表达相对增加1.6938倍。蛋白印记实验SOCS3和IRF8基因蛋白表达在动员后比动员前表达增加。  结论:重组人粒细胞集落刺激因子动员后,抑制供者外周血Th1/17、IL-17+Foxp3+Treg细胞群分化。rhG-CSF可能通过上调供者外周血CD4+T细胞中SOCS3及IRF8表达,抑制Th17细胞分化。
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