【摘 要】
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长期以来,由于抗生素不合理使用及滥用,导致沙门菌耐药性问题愈发严重。噬菌体属于病毒的一种,具有特异性杀灭细菌的能力。为寻找一种新的抗耐药菌手段,以6株多重耐药沙门菌（SA209、SH01、SH16、SH19、SH20、SH171）为宿主菌,与处理后的安阳市某规模化生猪养殖场粪便、污水样品及开封一种鸡场粪便样品混合培养,混合液离心、过滤后得到拟含噬菌体的溶液,通过点滴法和双层平板法进行噬菌体分离和鉴
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长期以来,由于抗生素不合理使用及滥用,导致沙门菌耐药性问题愈发严重。噬菌体属于病毒的一种,具有特异性杀灭细菌的能力。为寻找一种新的抗耐药菌手段,以6株多重耐药沙门菌（SA209、SH01、SH16、SH19、SH20、SH171）为宿主菌,与处理后的安阳市某规模化生猪养殖场粪便、污水样品及开封一种鸡场粪便样品混合培养,混合液离心、过滤后得到拟含噬菌体的溶液,通过点滴法和双层平板法进行噬菌体分离和鉴定;对分离得到的噬菌体进行了纯化、浓缩,通过透射电子显微镜观察其形态结构,然后分别测定其核酸类型、最佳感染复数、酸碱耐受性、裂解谱、温度耐受性、一步生长曲线,并且进一步测定了噬菌体有机溶剂敏感性、盐离子浓度对噬菌体活性影响、噬菌体体外抑菌效果。本试验结果将为噬菌体作为防治沙门菌感染的新型抗菌剂研发提供科学依据,具有重要的理论意义和实践应用价值。主要研究结果如下:1.噬菌体分离鉴定以沙门菌SA209和SH01为宿主菌,分离得到2株沙门菌噬菌体,分别命名为PSA-1噬菌体和PSH-1噬菌体。2.噬菌体形态学鉴定噬菌体PSA-1和PSH-1头部均为典型的二十面体结构,全长分别为75.9 nm、272.5 nm。头部长度分别约为61.1 nm、69.3 nm;噬菌体PSA-1无明显尾部结构,属于短尾噬菌体:噬菌体PSH-1具有约203.2nm长的尾部,属于长尾噬菌体。3.噬菌体最佳感染复数通过设定6个不同的感染复数（0.001、0.01、0.1、1、10、100）,使噬菌体感染宿主菌,之后测定各组噬菌体效价。结果显示,噬菌体PSA-1在感染复数为0.001时,效价最高,最高效价为8.5×1012 PFU/mL,所以其最佳感染复数为0.001。噬菌体PSH-1在感染复数为0.01时,效价最高,最高效价为8.9× 1014 PFU/mL,所以其最佳感染复数为0.01。4.噬菌体一步生长曲线噬菌体PSA-1感染宿主沙门菌SA209时,其潜伏期为10 min,裂解期为20 min,之后进入稳定期,平均裂解量为108 PFU/cell;噬菌体PSH-1感染宿主菌SH01的潜伏期为20 min,裂解期为20 min,之后进入稳定期,平均裂解量为495 PFU/cell。5.温度和pH稳定性设置不同温度（40℃、50℃、60℃、70℃、80℃）和不同的 pH（2、3、4、5、6、7、8、9、10、1 1、12、13）来处理噬菌体PSA-1和PSH-1的纯培养物,通过测定噬菌体的效价判定噬菌体的稳定性。噬菌体PSA-1和PSH-1均在pH为3-11和40℃-50℃的环境中保持稳定活性。6.有机溶剂敏感性试验部使用氯仿和异丙醇作用噬菌体PSA-1和PSH-1纯培养物一段时间,测定2株噬菌体的效价并未受到影响,说明噬菌体PSA-1和PSH-1的核衣壳外均无囊膜结构。7.核酸类型鉴定使用病毒DNA/RNA提取试剂盒提取噬菌体PSA-1和PSH-1的遗传物质,使用DNase I和RNase A作用后通过凝胶电泳验证发现2株噬菌体的核酸均为DNA。8.体外抑菌试验以商品牛奶为介质,通过先加入噬菌体,后接种宿主菌的方式测试噬菌体的体外抑菌能力,发现噬菌体PSA-1和PSH-1在4℃、室温（25℃左右）、37℃等不同温度下都可以对牛奶中宿主沙门菌的生长有很强的抑制能力。
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